[发明专利]具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法

说明书

本发明涉及蛋白领域，尤其涉及一种具有降血糖、降血压活性的山羊乳酪蛋白肽的制备。本发明的制备方法包括：先将山羊奶处理得到山羊乳酪蛋白。利用计算机虚拟酶切山羊奶酪蛋白，并预测不同蛋白酶切割山羊乳酪蛋白得到的多肽活性，筛选出最佳抑制DPP‑IV酶和ACE酶的蛋白酶种类，之后利用不同蛋白酶对山羊乳酪蛋白进行水解，并验证水解产物的活性，最后对水解产物进行纯化即为山羊乳酪蛋白肽。本发明方法利用生物信息学作为山羊乳酪蛋白活性预测的工具，可节省大量时间、科研成本、准确度高且具有靶向指导作用。利用本发明可制备获得具有DPP‑IV抑制活性和ACE抑制活性，蛋白回收率高、分子量较低且具有较好的胃肠消化稳定性的山羊乳酪蛋白肽。

技术领域

本发明涉及蛋白领域，尤其涉及一种具有降血糖、降血压活性的山羊乳酪蛋白肽的制备方法。

背景技术

糖尿病和高血压是世界上主要慢性死亡疾病。据统计，全世界一半以上的患者死于由心血管疾病引起的心血管并发症高血压或糖尿病。目前，有多种可用于治疗和/或控制高血压和糖尿病的市售药物，如DPP-IV抑制剂格列苯脲、西格列汀、维格列汀和沙格列汀等，ACE抑制类药物卡托普利福辛普利贝那普利等；这些药物对一种疾病显示出良好的治疗效果，同时身体也产生了较多副作用。因此，如何研发出天然食物来源具有良好治疗效果，并使副作用降至最小成为当前研究的挑战和前景。

羊乳富含蛋白质、脂类、碳水化合物、维生素、矿物质和其他微量营养素。有研究表明羊奶具有脂肪粒小，低致过敏性，易消化吸收，所以可以成为婴儿配方奶生产中的一种潜在替代品。此外，有报道称羊乳比牛乳具有更大的生物价值。近来的研究表明由多个氨基酸结合而成的短肽比氨基酸具有更好的消化吸收性能，并且营养效果和生理效果更为优越。食物源蛋白肽是利用含蛋白质较高的食物通过酶或微生物的降解，得到的具有生物活性的功能短肽。酪蛋白是山羊乳中含量最多的蛋白质，其氨基酸组成平衡，是优质的动物蛋白质资源。酪蛋白包含有多种生物活性序列，用适当的蛋白酶水解，从酪蛋白中释放出来，成为具有某种生理活性的肽段。

目前酶解法为蛋白肽的主要提取方法，酶解法的酶种类选择对于制备出的肽的功能活性有至关重要的作用，除此之外，由于原材料的生物活性不明确，需要进行大量的体内和体外活性的测定，这样不仅会花费大量的时间且会增加实验成本；微生物法时间周期过长，因此有必要寻求一种时间成本低、靶向作用强的制备蛋白肽的方法。

发明内容

本发明对蛋白质的一级结构进行分析，针对不同蛋白酶对蛋白质的酶切位点进行针对性的切割，以利用蛋白酶的酶解作用的发挥，提高蛋白回收率以及生物活性，节省大量时间成本和科研经费的同时又具有较好的靶向指导作用。

目前，国内外未见利用生物信息学筛选蛋白酶种类制备山羊乳酪蛋白具有DPP-IV(二肽基肽酶)酶抑制和ACE(血管紧张素转换酶)酶抑制功能肽的相关报道。

针对上述技术问题，本发明的目的在于公开了一种山羊乳酪蛋白肽的制备方法及应用，通过本发明可节省大量时间和科研成本，得到功效作用好、毒副作用小、工艺简单的较高DPP-IV酶、ACE酶抑制活性的山羊乳酪蛋白肽产品，该制备方法及产品可广泛应用于高血压和糖尿病的保健品和药物的制备中。

本发明的第一目的在于提供一种具有降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽的制备方法，包括以下步骤：

(1)基于生物信息学预测不同蛋白酶处理山羊奶酪蛋白得到山羊奶酪蛋白肽的降血糖、降血压活性，并利用生物信息学计算机虚拟筛选出较高降血糖、降血压活性的多种酶；

(2)将计算机模拟筛选出的多种酶中的任一种或者组合分别应用于酶解山羊奶酪蛋白，得到对应的酶解产物；

(3)试验测试并比较不同酶解产物的降血糖、降血压活性，验证计算机虚拟筛选的准确性，并得到更高降血糖、降血压活性的酶的种类，由更高降血糖、降血压活性的酶酶解处理得到的酶解产物即为具有更高降血糖、降血压活性的山羊奶酪蛋白肽。