[发明专利]一种基于铜纳米颗粒的检测赭曲霉毒素A的生物传感器

权利要求书

1. 一种基于铜纳米颗粒的检测赭曲霉毒素A的生物传感器，其特征在于，包括赭曲霉毒素A的适配体Apt、触发链Tr、发夹探针H1、CuSO₄、MOPs 缓冲液 、TM缓冲液、发夹探针H2以及形成四面体的DNA链S1、S2、S3、S4和封闭链B；

所述赭曲霉毒素A的适配体Apt的序列为SEQ ID No:1；

所述触发链Tr的序列为SEQ ID No:2；

所述发夹探针H1的序列为SEQ ID No:3；

所述发夹探针H2的序列为SEQ ID No:4；

所述S1的序列为SEQ ID No:5；

所述S2的序列为SEQ ID No:6；

所述S3的序列为SEQ ID No:7；

所述S4的序列为SEQ ID No:8；

所述封闭链B的序列为SEQ ID No:9；

所述的S2、S3、S4链的5’ 端修饰有巯基-SH。

2.根据权利要求1所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器，其特征在于，赭曲霉毒素A与赭曲霉毒素A的适配体Apt特异性结合，释放触发链Tr，在电极上依次进行链置换暴露封闭链B、杂交链式反应捕获大量CuNP及其溶解导致电位变化产生电化学信号。

3.一种权利要求1所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）铜纳米颗粒CuNP的制备：H1、CuSO₄在 MOPs 缓冲液中混合，再加入还原剂抗坏血酸钠，合成铜纳米颗粒H1-CuNP；H2、CuSO₄在 MOPs 缓冲液中混合，再加入还原剂抗坏血酸钠，合成铜纳米颗粒H2-CuNP；

（2）对电极进行预处理；

（3）DNA四面体制备及其修饰到步骤（2）处理的电极表面：将S1、S2、S3、S4和封闭链B在TM缓冲液中混合，得到DNA四面体；将制备好的DNA四面体与三(2-羧乙基)膦注入电极，在室温下反应；

（4）均相反应产生触发链Tr：赭曲霉毒素A的适配体Apt和触发链Tr，振荡，形成拱形探针AP；灭菌水，5×PBS缓冲液，拱形探针AP，赭曲霉毒素A孵育；

（5）电极上的链置换、杂交链式反应、CuNP的捕获及其溶解反应：将步骤（4）得到的触发链Tr、H1-CuNP和H2-CuNP，滴加到步骤（3）的电极上，反应，清洗。

4.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）预处理过程为：电极在氧化铝浆中进行抛光处理，直到呈镜面，用PBS和二次水反复冲洗。

5.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）DNA四面体的制备方法为：将等摩尔量的DNA四面体五条链混合在TM缓冲液中，在95℃反应，再逐渐冷却到4℃。

6.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）将DNA四面体修饰到电极表面的过程为：将制备好的DNA四面体与三(2-羧乙基)膦（TCEP）注入电极，在室温下反应过夜。

7.根据权利要求3所述的检测赭曲霉毒素A的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）的电极为金电极。

8.权利要求3所述的制备方法制备的检测赭曲霉毒素A的生物传感器在检测食品、环境中赭曲霉毒素A上的应用。

9. 根据权利要求8所述的应用，其特征在于，以Ag/AgCl为参比电极，以Pt电极为对电极，电位设置为-0.2到0.6V，电位增加0.004 V，振幅为50 mV，脉冲宽度0.05 s，脉冲周期为0.5 s，沉积电位-0.5 V，沉积时间6min；采用差分脉冲溶出伏安法读取CuNP电信号的变化，检测待测目标物。