[发明专利]一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子及其应用方法在审
| 申请号： | 202110829850.2 | 申请日： | 2021-07-22 |
| 公开（公告）号： | CN113563446A | 公开（公告）日： | 2021-10-29 |
| 发明（设计）人： | 钟伯雄;戴敏浩 | 申请（专利权）人： | 浙江超丝生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/435 | 分类号： | C07K14/435;C12N15/12;C12N15/85;A01K67/04 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 林超 |
| 地址： | 314031 浙江省嘉兴市秀洲区高照街*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 提高 力学 机械性能 单一 蛋白 分子 及其 应用 方法 | ||
1.一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子，其特征在于：所述的单一多聚蛋白分子是指由蜘蛛大壶状腺丝蛋白I分子的四种串联蛋白序列type1～type 4中的一种构成的单一的多聚蛋白序列。
2.根据权利要求1所述的一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子，其特征在于：所述的单一多聚蛋白分子是由四种串联蛋白序列type1～type4之一以多次重复聚合而成。
3.根据权利要求1所述的一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子，其特征在于：所述的单一多聚蛋白分子是由四种串联蛋白序列type1～type4之一以2-64次重复聚合而成。
4.根据权利要求1所述的一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子，其特征在于：所述的串联蛋白序列type1为SEQ ID NO.2，而形成第一种单一多聚蛋白分子；所述的串联蛋白序列type2为SEQ ID NO.4，而形成第二种单一多聚蛋白分子；所述的串联蛋白序列type3为SEQ ID NO.6，而形成第三种单一多聚蛋白分子；所述的串联蛋白序列type4为SEQ IDNO.8，而形成第四种单一多聚蛋白分子。
5.权利要求1所述的一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子的应用，其特征在于：在基因编辑和转基因家蚕中的应用。
6.权利要求5所述的一种提高力学机械性能的单一多聚蛋白分子的应用，其特征在于：在用于基因编辑和转基因家蚕生产制备提高力学机械性能的复合丝的应用。
7.一种提高力学机械性能的复合丝生产方法，其特征在于：
方法是先通过基因工程方法生物合成目的基因序列，所述的目的基因序列为权利要求1所述的单一多聚蛋白分子对应的基因碱基序列，将采用分子生物学技术构建外源基因载体，通过显微注射将外源基因载体导入家蚕卵内并整合到家蚕基因组内；
对家蚕进行多代培育，通过荧光显微镜筛选获得G1代阳性个体，G1代阳性个体分别与野生型交配或阳性个体自交得到G2代，G3代后均筛选阳性个体并采用阳性个体自交留种，到G8代育成稳定遗传的品种；利用G8代的家蚕进行生产分泌蚕丝而作为复合丝，获得了提高力学机械性能的复合丝。
8.根据权利要求7所述的一种提高力学机械性能的复合丝生产方法，其特征在于：所述的外源基因载体是采用以piggyBac为骨架的转基因载体或者应用于基因编辑的同源重组载体。
9.根据权利要求7或8所述的一种提高力学机械性能的复合丝生产方法，其特征在于：所述的外源基因载体包括外源基因表达框和荧光筛选标记基因表达框；
外源基因表达框包括外源基因和表达框的启动子，外源基因为权利要求1所述的单一多聚蛋白分子对应的基因碱基序列，外源基因表达框的启动子包括丝素蛋白重链、丝素蛋白轻链、丝素蛋白P25、丝胶蛋白等基因的启动子；
荧光筛选标记基因表达框包括荧光筛选标记基因和表达框的启动子，荧光筛选标记基因包括绿色荧光蛋白基因(GFP)和红色荧光蛋白基因(DsRed)，荧光筛选标记基因表达框的启动子包括IE-1、A3、3xP3启动子。
10.根据权利要求7所述的一种提高力学机械性能的复合丝生产方法，其特征在于：所述的复合丝的组成包含了单一多聚蛋白分子成分和蚕丝蛋白成分。
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