[发明专利]同时检测辣椒三种RNA病毒的多重RT-PCR引物组及其方法

权利要求书

1.一种同时检测辣椒三种RNA病毒的多重RT-PCR引物组，其特征在于，所述引物组包括：

检测烟草轻型绿花叶病毒的引物对TMGMV-F和TMGMV-R，PCR产物片段大小为523bp；检测小米椒内源RNA病毒1的引物对CFEV1-F和CFEV1-R，PCR产物片段大小为865bp；检测辣椒潜隐病毒2的引物对PCV2-F和PCV2-R，PCR产物片段大小为717bp；具体如下：

TMGMV-F：3’-TTCCGCTTATGCAGATCCTGT-5’，如SEQ ID NO.1所示；

TMGMV-R：3’-GACGAACAACCACTGCTGAT-5’，如SEQ ID NO.2所示；

CFEV1-F：3’-TTTCCAACACCGTGGACCAT-5’，如SEQ ID NO.3所示；

CFEV1-R：3’-ACAGGGACGAGTGCATTGAG-5’，如SEQ ID NO.4所示；

PCV2-F：3’-CACGTGTGAGGGCATTTGAC-5’，如SEQ ID NO.5所示；

PCV2-R：3’-GTCCGACACCGTATGCCTTT-5’，如SEQ ID NO.6所示。

2.一种包含如权利要求1所述多重RT-PCR引物组的试剂或试剂盒。

3.一种采用如权利要求1所述的多重RT-PCR引物组检测辣椒烟草轻型绿花叶病毒、小米椒内源RNA病毒1及辣椒潜隐病毒2三种病毒的多重RT-PCR检测方法，其特征在于，包括以下操作步骤：

(1)提取带病毒症状的辣椒组织的总RNA，反转录为cDNA；

(2)以步骤(1)得到的cDNA为模板，用权利要求1所述的引物组进行PCR扩增，获得扩增产物；

(3)PCR产物凝胶电泳，凝胶成像系统拍照，根据产物片段大小及阳性对照，判断病毒感染情况。

4.根据权利要求3所述的多重RT-PCR检测方法，其特征在于：步骤(1)中选择田间带病毒症状的辣椒幼嫩叶片提取其总RNA。

5.根据如权利要求3所述的多重RT-PCR检测方法，其特征在于：所述PCR的反应体系25.0μL，包括2×Taq PCR Mix反应液12.5μL、cDNA模板1.5μL、烟草轻型绿花叶病毒正向引物和反向引物各0.5μL、小米椒内源RNA病毒1正向引物和反向引物各0.3～0.4μL辣椒潜隐病毒2正向引物和反向引物各0.4～0.5μL、超纯水补至所需体积。

6.根据如权利要求3所述的多重RT-PCR检测方法，其特征在于，PCR的反应程序为：94℃预变性2min，94℃变性30s，56℃退火25～30s，72℃延伸30s，重复变性、退火、延伸共32个循环，最后72℃2min。