[发明专利]SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法

说明书

本发明公开了一种SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，包括以下步骤：配制北五加皮苷M梯度浓度为10.0～10000ng/mL的校正标示工作液。采用空白基质将各浓度的校正标示工作液稀释20倍，得到校正标示样品，所述空白基质为不含北五加皮苷M的SD大鼠血浆。采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将各浓度的校正标示样品稀释20倍，离心取上清液，用超纯水稀释2倍，采用LC‑MS/MS进样分析，得到北五加皮苷M的线性回归方程。采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将待测SD大鼠血浆稀释20倍，离心取上清液，用超纯水稀释2倍，采用LC‑MS/MS进样分析，根据北五加皮苷M的线性回归方程得到北五加皮苷M的含量。本发明测定方法对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体的是一种SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法。

背景技术

北五加皮苷M在科研研究、鉴定、药理实验等过程中具有广泛应用，对推动医药研发技术领域的发展具有重要意义。

研究SD大鼠血浆中北五加皮苷M的测定方法，对于研究北五加皮苷M在给药后，在血浆里的代谢情况具有重要意义。

现有技术中，对于SD大鼠血浆中北五加皮苷M的测定方法，测试的准确性低，并且稳定性差，给研究带来了极大的不便。

因此，有必要对现有技术中SD大鼠血浆中北五加皮苷M的测定方法做出改进。

发明内容

为了克服现有技术中的缺陷，本发明提供了一种SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，其对样品分析简单便捷，检出限低、灵敏度高、重复性和回收率好。

本发明公开了一种SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

以北五加皮苷M为溶质，以50wt％乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷M梯度浓度为10.0～10000ng/mL的校正标示工作液；

采用空白基质将各浓度的校正标示工作液稀释20倍，得到校正标示样品，所述空白基质为不含北五加皮苷M的SD大鼠血浆；

采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将各浓度的校正标示样品稀释20倍，离心取上清液，将上清液用超纯水稀释2倍，采用LC-MS/MS进样分析，得到北五加皮苷M的线性回归方程；

采用10.0ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将待测SD大鼠血浆稀释20倍，离心取上清液，将上清液用超纯水稀释2倍，采用LC-MS/MS进样分析，根据北五加皮苷M的线性回归方程得到SD大鼠血浆中北五加皮苷M的含量。

作为优选，所述LC-MS/MS分析中液相色谱条件包括：

固定相：填料粒径为5μm，直径2.1mm，长度50mm的ACE 5C18色谱柱；

流动相：流动相为A和B的混合体系；

A为甲酸乙酸铵水溶液，甲酸、乙酸铵水溶液和水的体积比为0.1:0.2:100，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为1mol/L；

B为甲酸乙酸铵甲醇乙腈溶液，甲酸、乙酸铵水溶液、甲醇和乙腈的体积比为0.1:0.1:50:50，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为1mol/L。

进一步优选，所述LC-MS/MS分析中液相色谱条件包括：流速：0.40mL/min；

柱温：40℃；

自动进样器温度：4℃；

进样量：10μL。

进一步优选，所述LC-MS/MS分析中梯度洗脱程序为：

0.01min，A的体积百分比为40％，B的体积百分比为60％；