[发明专利]SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法

权利要求书

1.一种SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：

以北五加皮苷M为溶质，以50wt%乙腈水溶液为溶剂，配制北五加皮苷M梯度浓度为10.0～10000 ng/mL的校正标示工作液；

采用空白基质将各浓度的校正标示工作液稀释20倍，得到校正标示样品，所述空白基质为不含北五加皮苷M的SD大鼠血浆；

采用10.0 ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将各浓度的校正标示样品稀释20倍，所述内标工作液以乙腈为溶剂，离心取上清液，将上清液用超纯水稀释2倍，采用 LC-MS/MS进样分析，得到北五加皮苷M的线性回归方程；

采用10.0 ng/mL甲苯磺丁脲内标工作液将待测SD大鼠血浆稀释20倍，离心取上清液，将上清液用超纯水稀释2倍，采用 LC-MS/MS进样分析，根据北五加皮苷M的线性回归方程得到SD大鼠血浆中北五加皮苷M的含量；

所述LC-MS/MS分析中液相色谱条件包括：流速：0.40 mL/min；

柱温：40℃；

自动进样器温度：4℃；

进样量：10μL；

固定相：填料粒径为5µm，直径2.1 mm，长度50 mm的ACE 5 C18色谱柱；

流动相：流动相为A和B的混合体系；

A为甲酸乙酸铵水溶液，甲酸、乙酸铵水溶液和水的体积比为0.1:0.2:100，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为1mol/L；

B为甲酸乙酸铵甲醇乙腈溶液，甲酸、乙酸铵水溶液、甲醇和乙腈的体积比为0.1:0.1:50:50，乙酸铵水溶液中乙酸铵的浓度为1mol/L；

所述LC-MS/MS分析中梯度洗脱程序为：

0.01min，A的体积百分比为40%，B的体积百分比为60%；

0.90min，A的体积百分比为0%，B的体积百分比为100%；

1.60min，A的体积百分比为0%，B的体积百分比为100%；

1.61min，A的体积百分比为40%，B的体积百分比为60%；

2.50min，A的体积百分比为40%，B的体积百分比为60%。

2.根据权利要求1所述的SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，其特征在于，LC-MS/MS分析中，液相色谱进样器清洗液为：弱洗采用50%甲醇水溶液，强洗采用甲醇、乙腈、异丙醇、水按照体积比1:1:1:1混合而成。

3.根据权利要求1所述的SD大鼠血浆中北五加皮苷M含量的测定方法，其特征在于，所述LC-MS/MS分析中质谱条件包括：

离子源：电喷雾离子源；

离子化模式：正离子模式；

分辨力模式为Unit；

碰撞气、气帘气、雾化气、辅助气1和辅助气2均为高纯氮气；

喷雾电压5500V。