[发明专利]一种提高Treg细胞活性的间充质干细胞的培养方法

说明书

本发明提供一种提高Treg细胞活性的间充质干细胞的培养方法，在间充质干细胞的培养过程中，在基础培养液中添加干细胞生长因子、成纤维细胞生长因子、肝素钠和前列腺素E2对间充质干细胞进行培养。干细胞生长因子及肝素钠可提高细胞的干性，成纤维细胞生长因子、前列腺素E2和肝素钠可提高间充质干细胞的激活Treg细胞活性的能力，从而达到减少细胞聚集增强间充质干细胞治疗各种疾病的效果。

技术领域

本发明属于细胞培养技术领域，尤其涉及一种提高Treg细胞活性的间充质干细胞的培养方法。

背景技术

间充质干细胞广泛存在于全身结缔组织和器官间质中，以骨髓组织中含量最为丰富，也可从胎儿脐血中分离得到，此外还存在于胎盘，羊水、脐静脉内皮下层、外周血及肝脏、脂肪、肌肉、皮肤等多种组织中。间充质干细胞具有高度增殖、自我更新和多向分化潜能，间充质干细胞不仅能够向多种组织和细胞分化，而且易于分离、培养、扩增，易于外源基因的导入和表达，在体外长期培养过程中始终保持多向分化的潜能，遗传背景相当稳定。

1995年间充质干细胞首次应用于临床应用，2012年Osiris公司申报间充质干细胞作为药品上市得到加拿大FDA的批准，间充质干细胞的临床应用达到一个历史性高度。间充质干细胞目前已顶替胎盘干细胞而成为生物医学研究中首选的种子细胞，并被广泛应用于各种疾病的基础及临床研究。10至20年后，干细胞将会成为一种基本的医疗技术，帮助人们解决现在无法克服的疾病。

干细胞进行疾病的治疗，目前全球范围内已有10家企业的干细胞注射液已经上市，目前已经进入了临床使用阶段。目前国内已有多家企业已申报临床试验并已经通过审批，目前进入临床I，II期试验。申请号为202010351332.X的中国专利《脐带间充质干细胞在制备促进Treg的药物中的应用》采用脐带进行间充质干细胞的分离，并注射裸鼠体内，验证脐带间充质干细胞对裸鼠胸腺发育的影响及发育机制探索，证明脐带间充质干细胞可提高Treg细胞水平，但此实验中细胞的培养采用的是传统的分离及血清培养，验证的是脐带间充质干细胞本身的作用。目前国内外研究中，采用间充质干细胞进行多种免疫疾病的治疗，但是其培养的方法尚停留于传统的血清培养，或者无血清培养可提高其使用安全性，但是在提高间充质干细胞的Treg激活方面鲜有报道。

发明内容

针对现有技术中间充质干细胞激活Treg细胞的能力较弱的情况，本发明提供了间充质干细胞的培养方法，通过该培养方法可以提高间充质干细胞激活Treg细胞的能力，有助于间充质干细胞治疗疾病的有效性。

为实现上述发明目的，本发明采用下述技术方案予以实现：

一种提高Treg细胞活性的间充质干细胞的培养方法，在间充质干细胞的培养过程中，在基础培养液中添加生长因子、抗凝剂和不饱和脂肪酸。

优选地，所述基础培养液为含有10%胎牛血清的aMEM培养液。

优选地，所述生长因子选自干细胞生长因子或成纤维细胞生长因子中的至少一种。

优选地，所述抗凝剂选自肝素钠；所述不饱和脂肪酸选自前列腺素E2。

优选地，在基础培养液中添加生长因子、抗凝剂和不饱和脂肪酸的方式如下：

（1）在P0代间充质干细胞的培养过程中，在培养液中添加干细胞生长因子及肝素钠；

（2）在P1-P3代间充质干细胞的培养过程中，在培养液中添加干细胞生长因子及成纤维细胞生长因子；

（3）在P4，P5 代间充质干细胞的培养过程中，在培养液中添加了成纤维细胞生长因子、抗凝剂和不饱和脂肪酸。