[发明专利]一种GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养液及其应用

权利要求书

1.一种GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养液，其特征在于，在M16培养液中添加Nampt激活剂P7C3，所述Nampt激活剂P7C3的添加浓度为0.1-10µM。

2.一种改善GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养质量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、采集GV期卵母细胞并置于M2液滴中备用；

S2、将卵母细胞转移至平衡液中30秒，随后转移至玻璃化冷冻液中20-30秒，然后迅速将卵母细胞置于载杆前端，投入液氮；

S3、解冻时，将S2所述载杆迅速从液氮中取出，置于含0.5M蔗糖的PBS中作用5min，然后用M2液清洗三遍后备用；

S4、将S3获得的卵母细胞放入GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养液中，覆盖上石蜡油于培养箱中进行体外成熟培养。

3.根据权利要求1所述GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养液，其特征在于，所述Nampt激活剂P7C3的添加浓度为1µM。

4.根据权利要求2所述改善GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养质量的方法，其特征在于，所述步骤S2中，卵母细胞从进入玻璃化冷冻液开始到投入液氮的时间控制在25秒内。

5.根据权利要求4所述改善GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养质量的方法，其特征在于，所述平衡液为含10% DMSO和10% EG的PBS液。

6.根据权利要求5所述改善GV期冷冻卵母细胞解冻后体外成熟培养质量的方法，其特征在于，所述玻璃化冷冻液为含15% EG、15%DMSO、0.5M蔗糖、30%Ficoll的PBS液。