[发明专利]一种含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒、制备方法及应用在审
| 申请号： | 202110826322.1 | 申请日： | 2021-07-21 |
| 公开（公告）号： | CN113502300A | 公开（公告）日： | 2021-10-15 |
| 发明（设计）人： | 刘志伟;李梦伟;徐妍;袁琪;蒋昕娈;朱立东 | 申请（专利权）人： | 徐州医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/53;C12N5/10;C12N15/113;C12Q1/66 |
| 代理公司： | 南京业腾知识产权代理事务所(特殊普通合伙) 32321 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 221004 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 含有 hdac10 基因 启动子 序列 报告 重组 质粒 制备 方法 应用 | ||
1.一种含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒，其特征在于，以含双荧光素酶报告基因的pGL3-basic质粒为载体，在pGL3-basic质粒的KpnI和MluI的限制性酶切位点之间，插入HDAC10基因启动子序列，得到含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒；所述HDAC10基因启动子序列的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.如权利要求1所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒，其特征在于，所述pGL3-basic质粒为pGL3-basic质粒4818bp。
3.权利要求1或2所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)设计HDAC10基因启动子的引物，以大鼠基因组为模板，进行PCR扩增，得到含有HDAC10基因启动子的目的片段；
(2)采用限制性内切酶KpnI和MluI分别对含有HDAC10基因启动子的目的片段和pGL3-basic基础质粒进行双酶切，然后将酶切产物进行连接，得到连接后的重组质粒；
(3)筛选连接后的重组质粒，并测序鉴定，得到含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒。
4.如权利要求3所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述HDAC10基因启动子的引物由上游引物和下游引物组成，上游引物序列如SEQ ID NO.2所示，下游引物序列如SEQ ID NO.3所示。
5.如权利要求3所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的反应体系为：25μL体系，premix：12.5μL，模板：2μL，引物：5μL，ddH2O：5.5μL。
6.如权利要求3或4或5所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述PCR扩增的反应条件为：98℃变性2min；循环为98℃20s,58℃20s,72℃1min30s,共进行32个循环，72℃延伸10min。
7.权利要求1或2所述含有HDAC10基因启动子序列和报告基因的重组质粒在制备筛选抗缺氧损伤药物中的应用。
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