[发明专利]一种提高大肠杆菌工程菌合成2’-岩藻糖基乳糖产量的方法有效

专利信息
申请号: 202110823715.7 申请日: 2021-07-20
公开(公告)号: CN113462629B 公开(公告)日: 2023-01-10
发明(设计)人: 刘璐;徐铮;夏洪志;牛堃;李古月 申请(专利权)人: 南通励成生物工程有限公司
主分类号: C12N1/21 分类号: C12N1/21;C12N15/31;C12N15/52;C12N15/70;C12P19/00;C12R1/19
代理公司: 南京苏高专利商标事务所(普通合伙) 32204 代理人: 王艳
地址: 226010 江苏省南通*** 国省代码: 江苏;32
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摘要:
搜索关键词: 一种 提高 大肠杆菌 工程 合成 岩藻糖基 乳糖 产量 方法
【权利要求书】:

1.一种重组菌株,其特征在于,所述重组菌株是将重组质粒pETDuet-vgb-manC-B和pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY共转化到大肠杆菌获得,所述重组质粒pETDuet-vgb-manC-B是将连接有特殊RBS序列的vgb基因克隆到pETDuet-1质粒上获得重组质粒pETDuet-vgb,然后将基因簇manC-B克隆到pETDuet-vgb上获得重组质粒pETDuet-vgb-manC-B,所述重组质粒pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY是将基因簇gmd-fcl克隆到pCDFDuet-1质粒上获得重组质粒pCDFDuet-gmd-fcl,然后将wcfB基因与lacY基因通过RBS序列连接得到wcfB-lacY,再克隆到pCDFDuet-gmd-fcl上获得重组质粒pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY,所述大肠杆菌菌株为JM109(DE3)菌株,所述特殊RBS序列为TCGATTAAGGCTATTATTATCAT,所述RBS序列为AAGAAGGAGATATACC。

2.权利要求1所述的重组菌株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:

1)重组质粒pETDuet-vgb-manC-B的构建:将连接有特殊RBS序列“TCGATTAAGGCTATTATTATCAT”的vgb基因克隆到pETDuet-1质粒上获得重组质粒pETDuet-vgb,然后将基因簇manC-B克隆到pETDuet-vgb上获得重组质粒pETDuet-vgb-manC-B

2)重组质粒pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY的构建:PCR获得的gmd-fcl基因簇克隆到pCDFDuet-1质粒,WcfB基因与lacY基因分别被PCR扩增获得并纯化后,再通过重叠PCR方法连接,两基因之间为RBS序列“AAGAAGGAGATATACC”得到wcfB-lacY,最后将wcfB-lacY克隆到pCDFDuet-gmd-fcl质粒的NdeI和XhoI位点即得到重组质粒pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY;

3)重组质粒pETDuet-vgb-manC-B和pCDFDuet-gmd-fcl-wcfB-lacY共转化到大肠杆菌。

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