[发明专利]肿瘤坏死因子α检测试剂盒及其检测方法

说明书

本发明涉及一种利用化学发光免疫分析技术的肿瘤坏死因子α测试剂盒，同时本发明还涉及测定肿瘤坏死因子α浓度的方法、试剂的组成及成分，属于医学检验测定技术领域。本发明的试剂盒主要包括：包被有生物素的肿瘤坏死因子α抗体、磁性纳米微球工作液、化学发光标记物标记抗体工作液、样品处理液以及发光启动剂，且样品处理液中含有尿素或盐酸胍，溶剂环境发生变化，肿瘤坏死因子α的三聚体结构逐渐解聚为单体和无规线团，解聚后的单体将抗体结合位点更充分的暴露出来，提高检测的可重复性和准确性。使用本发明的肿瘤坏死因子α测试剂盒操作简便，灵敏度高，特异性好，与其他检测方法检验结果相符合。

技术领域

本发明涉及一种肿瘤坏死因子α检测试剂盒，同时本发明还涉及测定肿瘤坏死因子α浓度的方法，属于医学检验测定技术领域。

背景技术

肿瘤坏死因子α(TNF-α)是一种主要由巨噬细胞和单核细胞产生的促炎细胞因子，并参与正常炎症反应和免疫反应。正常水平的肿瘤坏死因子α可以参与抵抗细菌、病毒和寄生虫的感染，促进组织修复，引发肿瘤细胞凋亡，但当肿瘤坏死因子α在体内大量产生和释放会破坏机体的免疫平衡，引发多种病理损伤，如恶病质和败血症休克所致的多器官功能衰竭、类风湿性关节炎、多发性硬化症、骨髓造血紊乱综合症等多种疾病。测定血清中肿瘤坏死因子α的含量有助于这些疾病的诊断与治疗。

测定肿瘤坏死因子α方法主要分为三大类：生物活性检测法、免疫学检测法和分子生物学检测法。生物活性检测法：目前应用较多的是细胞增殖法中的MTT比色法。MTT法的特异性差且检验样品易受其他活性物质干扰，如TNF和IL-l的活性具有交叉性，导致结果出现偏差。免疫学检测法中常用的酶联免疫检测技术是目前肿瘤坏死因子α的主要检测手段，但ELISA法中酶标记物不稳定，酶标记物易受环境如温度、pH值等影响，方法重复性和灵敏度较差。分子生物学检测方法检测的成分是细胞因子的mRNA，不能客观地反映蛋白的表达量，使结果产生差异。

发明内容

本发现的一个目的在于提供一种利用化学发光免疫分析技术的肿瘤坏死因子α试剂盒，本发明另一个目的在于提供一种利用化学发光免疫分析技术的肿瘤坏死因子α检测方法。

为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：一种肿瘤坏死因子α检测试剂盒，包括包被有生物素的肿瘤坏死因子α抗体、磁性纳米微球工作液、化学发光标记物标记抗体工作液、样品处理液以及发光激发剂，其中，样品处理液中含有浓度为1-4moL/L的尿素或盐酸胍的缓冲液。

进一步地，所述化学发光标记物标记抗体工作液中的化学发光标记物为吖啶酯、吖啶盐和吖啶酰肼中的一种或多种。

进一步地，所述化学发光标记物标记抗体工作液中标记的抗体为抗人IgG或IgM中的一种或多种。

进一步地，所述磁性纳米微球工作液中磁微粒的粒径为0.1-10μm。

进一步地，所述发光激发剂包括激发剂A和激发剂B，所述激发剂A中为硝酸和过氧化氢的混合液，所述激发剂B为氢氧化钠溶液。

进一步地，所述肿瘤坏死因子α检测试剂盒还包括肿瘤坏死因子α的校准品和质控品，所述校准品和质控品为冻干粉或液体。

进一步地，所述肿瘤坏死因子α检测试剂盒中还包括20X-50X浓缩洗涤液。

本发明还提供一种肿瘤坏死因子α的检测方法，包括以下步骤：

S1、提供待测生物样品、如上所述的肿瘤坏死因子α检测试剂盒；

S2、所述待测生物样品中加入包被有生物素的肿瘤坏死因子α抗体；

S3、加入磁微粒，混匀；

S4、洗涤，而后加入标记有化学发光标记物的抗体，混匀；

S5、洗涤，而后加入发光启动剂，检测发光强度。