[发明专利]SFV-helper质粒、pSFVCs-LacZ病毒样颗粒及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，包括：

(1)构建SFV-helper质粒；

(2)将pSFVCs-Lacz、SFV-helper质粒体外转录成mRNA，然后将mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs-Lacz病毒样颗粒；

其中，所述SFV-helper质粒是通过构建如SEQ ID NO.1所示的重组载体，并合成如SEQID NO.2所示的插入片段基因，然后将所述插入片段基因克隆入所述重组载体而得。

2.如权利要求1所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1)包括：

(1.1)构建重组载体，构建得到的重组载体的序列为SEQ ID NO.1；

(1.2)合成插入片段基因，所述插入片段的序列为SEQ ID NO.2；

(1.3)将重组载体与插入片段进行同源重组，重组的产物转化DH5α感受态细菌，涂布平板，倒置培养，提取质粒，得到SFV-helper质粒，其中，所述SFV-helper质粒的序列为SEQ IDNO.3。

3.如权利要求2所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1.3)包括：

将重组载体与插入片段进行同源重组，重组的产物转化DH5α感受态细菌，涂布氨苄抗性的LB平板，35-38℃倒置培养10-20小时，将菌落PCR阳性的菌落进行小摇，保菌，提取质粒；

然后将提取的质粒酶切鉴定及测序。

4.如权利要求2所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(1.1)包括：

设计与合成引物，所述引物包括第一段-F、第一段-R、及第二段-F、第二段-R：

以pSFVCs-lacz为模板，分别以第一段-F、第一段-R为引物扩增片段1，以第二段-F、第二段-R为引物扩增片段2进行扩增，得到载体片段1和载体片段2；

将所述载体片段1和载体片段2同源重组，得到重组产物；

将重组产物加入到感受态细胞DH5α细胞，进行重组产物转化；

将转化后的重组产物进行重组产物鉴定；

将鉴定后的重组产物提取质粒；

对所述质粒进行酶切鉴定及测序。

5.如权利要求3所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，所述引物的序列设计如下：

第一段-F的序列为SEQ ID NO.4；

第一段-R的序列为SEQ ID NO.5；

第二段-F的序列为SEQ ID NO.6；

第二段-R的序列为SEQ ID NO.7。

6.如权利要求1所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，其特征在于，步骤(2)包括：

线性化所述pSFVCs-Lacz和SFV-helper；

将线性化后的pSFVCs-Lacz及SFV-heleper进行体外转录；

将pSFVCs-Lacz及pSFVCs-heleper质粒体外转录的mRNA共电转入BHK细胞中，得到pSFVCs-Lacz病毒样颗粒。

7.一种SFV-helper质粒，其特征在于，所述SFV-helper质粒是通过构建如SEQ ID NO.1所示的重组载体，并合成如SEQ ID NO.2所示的插入片段基因，然后将所述插入片段基因克隆入所述重组载体而得。

8.一种pSFVCs-LacZ病毒样颗粒，其特征在于，其由权利要求1-6任一项所述的制备方法制得。

9.如权利要求1-6任一项所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，如权利要求7所述的SFV-helper辅助质粒，以及如权利要求8所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒在β-半乳糖苷酶的表达中的应用。

10.如权利要求1-6任一项所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒的制备方法，如权利要求7所述的SFV-helper辅助质粒，以及如权利要求8所述的pSFVCs-LacZ病毒样颗粒在食品、治疗药物、动物模型中的应用。