[发明专利]一种固液相结合制备达西高血糖素的方法

说明书

本发明公开了一种固液相结合制备达西高血糖素的方法，本发明首次采用液相法合成单体Boc‑His(Trt)‑Ser(tBu)‑Gln(Trt)‑OH、Fmoc‑Gly‑Thr(tBu)‑OH、Fmoc‑Leu‑Asp(OtBu)‑OH、Fmoc‑Ala‑Arg(Pbf)‑OH、Fmoc‑Ala‑Glu(OtBu)‑OH、Fmoc‑Val‑Lys(Boc)‑OH、Fmoc‑Leu‑Glu(OtBu)‑OH，然后再用上述单体作原料固相制备达西高血糖素。本发明能够有效的提高粗肽的纯度，降低纯化的难度，提高终产品的收率，有利于合成规模的大规模工业化应用，降低生产成本。

技术领域

本发明涉及多肽合成领域，特别涉及一种合成达西高血糖素的方法。

背景技术

先天性高胰岛素性低血糖血症（Congenital Hyperinsulinemic Hypoglycemia，CHI）又称婴儿持续性高胰岛素血症性低血糖症(PHHI)。患有这种疾病的人有异常高水平的胰岛素，经常发生低血糖症。2018年5月11日，该疾病被列入中国国家卫生健康委员会等5部门联合制定的《第一批罕见病目录》。该病以药物治疗为主，如药物治疗无效可外科治疗（开腹胰腺切除术）。

严重低血糖症是一种急性的、危及生命的疾病，主要由胰岛素治疗引起的血糖水平严重下降引起，是糖尿病治疗中最令人担心的并发症之一。最常见低血糖原因为胰岛素治疗和磺脲类药物，其发生率约占20%，尤其是第一代磺脲类药物氯磺丙脲最易引起低血糖。

2021年03月23日Zealand Pharma A/S生物技术公司宣布，美国食品和药物管理局（FDA）已批准Zegalogue（dasiglucagon）注射液，用于治疗年龄在6岁及以上儿童和成人糖尿病患者的严重低血糖。达西高血糖素（Dasiglucagon）是目前第一个也是唯一一个用于治疗6岁及以上儿童和成人糖尿病患者严重低血糖的胰高血糖素类似物。达西高血糖素有29个氨基酸残基组成，分子量3185.57，其氨基酸序列如下：

H-¹His-Ser-Gln-Gly-⁵Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-¹⁰Tyr-Ser-Lys-Tyr-Leu-¹⁵Asp-Aib-Ala-Arg-Ala-²⁰Glu-Glu-Phe-Val-Lys-²⁵Trp-Leu-Glu-Ser-Thr-OH

原研专利EP2875043（CN104662038）采用标准的Fmoc化学固相合成法合成达西高血糖素，其中用到假脯氨酸Fmoc-Phe-Thr(Ψ，Me，Me，pro)-OH、Fmoc-Asp-Ser(Ψ，Me，Me，pro)-OH和Fmoc-Glu-Ser(Ψ，Me，Me，pro)-OH来作为原料。该专利的合成方法，主要缺点是肽链较长，固相逐步合成会导致粗肽纯度较低，并且肽序中富含Gly、Ala等结构简单的氨基酸残基，容易产生缺失Gly或Ala杂质肽，这样就会造成纯化难度较大，总收率较低。

为了提高粗肽的纯度，减少缺失Gly或Ala杂质肽的产生，本申请人对达西高血糖素的合成方法进行了研究，用片段法合成的方法得到了本发明的技术方案。

发明内容

本发明的目的是提供一种片段法制备达西高血糖素的方法。本发明降低了合成难度，提高了粗肽纯度，从而降低了纯化难度，提高了收率，降低了生产成本，有利于规模化工业生产。

为实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

(a)液相合成单体Boc-His(Trt)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-Glu(OtBu)-OH；