[发明专利]一种固液相结合制备达西高血糖素的方法

权利要求书

1.一种固液相结合制备达西高血糖素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(a)液相合成单体Boc-His(Trt)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Gly-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-Glu(OtBu)-OH；

(b)采用Wang resins或2-CTC resins为固相载体，用Fmoc-Thr(tBu)-OH与之偶联反应制备Fmoc-Thr(tBu)-树脂，再按序列依次偶联Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Leu-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Val-Lys(Boc)–OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ala-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Aib-OH、Fmoc-Leu-Asp(OtBu)-OH，Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)–OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Thr (tBu)-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Gly-Thr(tBu)-OH、Boc-¹His(Trt)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-OH得到达西高血糖素肽树脂:Boc-¹His(Trt)-Ser(tBu)-Gln(Trt)-Gly-⁵Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-¹⁰Tyr(tBu)-Ser(tBu)-Lys(Boc)-Tyr(tBu)-Leu-¹⁵Asp(OtBu)-Aib-Ala-Arg(Pbf)-Ala-²⁰Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Phe-Val-Lys(Boc)-²⁵Trp(Boc)-Leu-Glu(OtBu)-Ser(tBu)-Thr(tBu)-树脂；

（c）肽树脂经裂解、纯化、冻干得达西高血糖素精肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（a）合成单体Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH的具体操作步骤为：取碱A溶解在溶剂B中，配成碱性溶液；在低温浴下将H-Lys(Boc)-OH溶解于配置好的碱溶液中，且溶解后溶液仍显碱性；低温下向反应液中加入Fmoc-Val-OSu溶液，滴加完毕后，升温继续搅拌反应,TLC监测反应终点，经浓缩、调酸、析晶、重结晶，得到单体Fmoc-Val-Lys(Boc)-OH；其中，碱A和溶剂B配成的碱性溶液是氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钾水溶液或与水互溶的有机溶剂的混合溶液，或者是三乙胺、二乙胺、N，N-二异丙基乙胺有机碱的有机溶液。

3. 根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（a）合成单体Fmoc-Gly-Thr(tBu)-OH的具体操作步骤为：取碱A溶解在溶剂B中，配成碱性溶液；在低温浴下将H-Thr(tBu)-OH溶解于配置好的碱溶液中，且溶解后溶液仍显碱性；低温下向反应液中加入Fmoc-Gly -OSu溶液，滴加完毕后，升温继续搅拌反应,TLC监测反应终点，经浓缩、调酸、析晶、重结晶，得到单体Fmoc-Gly-Thr(tBu)-OH；其中，碱A和溶剂B配成的碱性溶液是氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸氢钾、碳酸钾水溶液或与水互溶的有机溶剂的混合溶液，或者是三乙胺、二乙胺、N，N-二异丙基乙胺有机碱的有机溶液。