[发明专利]一种自参比比率电化学生物传感器的构建方法及其黄曲霉毒素B1检测应用

权利要求书

1.基于电化学生物传感器用于检测黄曲霉毒素B1的用途，其特征在于，步骤如下：

(1)首先制备得到AuNPs溶液；然后将sDNA溶液和TCEP溶液混合，得到混合溶液A；再将相同浓度的Fc-Apt溶液和Fc-aDNA溶液混合均匀，得到混合溶液B；

(2)取步骤(1)制备的AuNPs溶液滴加到玻碳电极表面，进行第一次孵育，然后取步骤(1)制备的混合溶液A继续滴加到玻碳电极表面，固定反应一段时间；通过Au-S键结合作用力，将sDNA链固定在玻碳电极表面；再将巯基己醇滴加到玻碳电极表面，进行第二次孵育；最后将混合溶液B修饰在玻碳电极表面，进行第三次孵育，得到自参比比率电化学生物传感器；

(3)取多个所述电化学生物传感器，在其表面分别修饰不同浓度V1体积的AFB1溶液，一个浓度的AFB1溶液对应修饰一个电化学生物传感器，浓度和电化学生物传感器呈一一对应关系；经常温孵育一段时间，得到已完成识别检测的电化学生物传感器界面；

(4)用GCE工作电极、Pt对电极和Ag/AgCl参比电极三电极体系，在CHI660E电化学工作站上选择交流伏安法检测步骤(3)中修饰AFB1的电化学生物传感器界面电流；由于传感器表面的Fc-Apt与目标物结合并被带离电极表面，交流伏安法测量电极表面剩余的Fc-Apt产生的Fc氧化还原电流，记为I_Fc-Apt；Fc-aDNA不与目标物结合，检测不发生变化的Fc-aDNA产生的Fc氧化还原电流，记为I_Fc-aDNA；以I_Fc-Apt和I_Fc-aDNA作比率，I_Fc-Apt/I_Fc-aDNA比率信号值与AFB1溶液的浓度呈负相关，每一个浓度的AFB1会对应一个比率信号值，根据比率信号值和AFB1浓度的对数值构建得到标准曲线；

(5)样品中AFB1的检测：将样品处理后得到样品液，修饰V2体积的样品液于电化学生物传感器表面，常温孵育后按照步骤(4)进行操作测定电流值，分析数据得I_Fc-Apt/I_Fc-aDNA比率信号值；将I_Fc-Apt/I_Fc-aDNA比率信号值代入步骤(4)构建的标准曲线，即可获知样品中AFB1的浓度；实现未知样品中黄曲霉毒素B1检测的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(1)中，所述AuNPs溶液的浓度为5nM；所述sDNA溶液和TCEP溶液的浓度分别为0.5μM和1mM；所述Fc-Apt和Fc-aDNA的浓度均为0.5μM。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(1)中，所述sDNA溶液和TCEP溶液混合时的体积比为1:1；所述Fc-Apt溶液和Fc-aDNA溶液混合时的体积比为1:1。

4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(2)中，所述AuNPs溶液、混合溶液A、混合溶液B滴加到GCE电极表面的用量均为8μL。

5.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(2)中，所述固定反应一段时间为14h；所述巯基己醇的浓度为1mM，滴加到GCE电极表面的用量为8μL。

6.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(2)中，所述第一次孵育的温度为37℃，孵育时间为30-80min；所述第二次孵育为常温孵育，孵育时间为30-80min；所述第三次孵育为常温孵育，孵育时间为60min。

7.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(3)中，所述AFB1溶液的浓度为0.1pgmL^-1-10ng mL^-1；所述常温孵育一段时间为30-80min。

8.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(5)中，所述常温孵育一段时间为30-80min。

9.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，步骤(3)-(5)中所述V1、V2的用量均为8μL。