[发明专利]检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用

说明书

本发明公开了一种检测1型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑1)、3型鸭甲型肝炎病毒(DHAV‑3)和鸭坦布苏病毒(DTMUV)的引物，并建立检测方法和制备检测试剂盒。本申请试剂盒方法简单、结果准确、灵敏度高，DHAV‑3核酸的检测极限为10pg，DTMUV核酸的检测极限为10pg，DHAV‑1核酸的检测极限为100pg，克服了多重引物互相干扰的问题，在临床检测中检测结果稳定。

技术领域

本发明属于分子检测技术领域，具体涉及一种检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用。

背景技术

鸭病毒性肝炎(duck viral hepatitis，DVH)是由鸭肝炎病毒(duck hepatit-isvirus，DHV)引起3周龄内雏鸭的急性、高度接触性、致死性传染病。目前，已明确引起鸭肝炎的病原主要有鸭甲型肝炎病毒(duck hepatitis A virus，DHAV)和鸭星状病毒(duckastrovirus，DAstV)。DHAV被分为3个类型，分别为1型DHAV(DHAV-1)、2型DHAV(DHAV-2)和3型DHAV(DHAV-3)。其中，DHAV-1、DHAV-3在中国大陆地区流行，可单独或混合感染雏鸭。

鸭坦布苏病毒(duck tembusu virus，DTMUV)，又称鸭黄病毒，是2010年4月以来在我国主要种鸭、蛋鸭养殖区福建、山东、浙江、上海、江苏、广西等地陆续爆发的以蛋鸭、种鸭产蛋骤然大幅下降为主要临床特征、以出血性卵巢炎为主要病变特征的一种新发的鸭急性传染病。由于该病是一种新发传染病，目前仍然是危害养鸭业的重要疫病。

DTMUV可感染家禽与其他鸟类，病毒感染的雏鸭表现一些临床症状和病理变化与DVH相似，当上述2种及2种以上病毒混合感染时，在临床诊断中很难做出准确判断，常规诊断方法(比如病原分离鉴定和血清学试验等)操作繁杂、费时费力，而且不易进行鉴别诊断，单重分子检测，在样品数量大时，操作繁琐，容易出错；但多重分子检测不同引物间容易相互干扰。

因此，如何提供一种快速、敏感检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒方法是本领域亟待解决的问题。

发明内容

本发明公开了一种检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物，引物序列为：

DHAV-1 F GGTGCAAGGGACCAGAAG，SEQ ID NO.1；

DHAV-1 R GTACCTGCGGACCAACAG，SEQ ID NO.2；

DHAV-3 F AAGGAAGTTCTTGAAGGCAA，SEQ ID NO.3；

DHAV-3 R CGAAAGTGGAGATTAGGTGT，EQ ID NO.4；

DTMUV F TTGCTGCCATTTTCATAGGC，SEQ ID NO.5；

DTMUV R ACCCCTGTCCACAAAATCTT，SEQ ID NO.6；

一种基于1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒引物的试剂盒包括：

PCR反应液含10×PCR buffer、10mM dNTPs、rTaq DNA聚合酶、反应引物：DHAV-1F、DHAV-1 R、DHAV-3 F、DHAV-3 R、DTMUV F、DTMUV R；

DHAV-1+DHAV-3+DTMUV模板；ddH₂O

一种基于1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒引物的试剂盒的检测方法，包括以下步骤：