[发明专利]检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物及应用

权利要求书

1.一种检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒的引物，其特征在于，引物序列为：

DHAV-1 F GGTGCAAGGGACCAGAAG，SEQ ID NO.1；

DHAV-1 R GTACCTGCGGACCAACAG，SEQ ID NO.2；

DHAV-3 F AAGGAAGTTCTTGAAGGCAA，SEQ ID NO.3；

DHAV-3 R CGAAAGTGGAGATTAGGTGT，EQ ID NO.4；

DTMUV F TTGCTGCCATTTTCATAGGC，SEQ ID NO.5；

DTMUV R ACCCCTGTCCACAAAATCTT，SEQ ID NO.6。

2.一种基于权利要求1所述检测1型、3型鸭甲型肝炎病毒和鸭坦布苏病毒引物的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：

PCR反应液含10×PCR buffer、10mM dNTPs、rTaq DNA聚合酶、反应引物：DHAV-1 F、DHAV-1 R、DHAV-3 F、DHAV-3 R、DTMUV F、DTMUV R；

DHAV-1+DHAV-3+DTMUV模板；ddH₂O。

3.一种基于权利要求2所述试剂盒的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)用DHAV-1 F、DHAV-1 R、DHAV-3 F、DHAV-3 R、DTMUV F、DTMUV R引物对步骤(1)中反转录的cDNA模板进行扩增，以DHAV-1+DHAV-3+DTMUV阳性模板扩增作为阳性对照，以ddH₂O模板作为阴性对照；

(2)PCR产物经过电泳后，通过特异性扩增条带来判断样品携带病毒情况。

4.根据权利要求3所述试剂盒的检测方法，其特征在于，所述反应体系为：50μL，10×PCR buffer4μL，dNTPs 3.5μL(10mM)，rTaq DNA聚合酶

0.8μL(200U/μL)，反应引物DHAV-1 F、DHAV-1 R、DHAV-3 F、DHAV-3 R、DTMUV F、DTMUVR终浓度均为1μM/mL，模板各1μL(10ng/μL)。

5.根据权利要求3所述试剂盒的检测方法，其特征在于，所述扩增反应条件为：94℃预变性4min；94℃变性40s，54--56℃退火40s，72℃延伸60s，35个循环；72℃最终延伸10min，4℃保存。