[发明专利]一种基于COⅠ基因鉴别绵羊毛与山羊毛的方法

说明书

本发明公开了一种基于COⅠ基因鉴别绵羊毛与山羊毛的方法。提取羊毛的DNA；利用COⅠ基因引物对提取到的DNA进行PCR扩增，扩增出380bp长度的PCR扩增产物；将PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳检测后，利用胶纯化试剂盒回收，测序得到测序结果，根据测序结果进行绵羊毛与山羊毛的物种鉴别。本发明方法特异性强，简单易操作，避免了传统外观鉴定的主观因素影响，且可鉴别经纺织加工后外观改变难以从形态上进行识别的羊毛制品，结果客观准确，可信度高。

技术领域

本发明属于分子生物技术领域的一种鉴别生物物种方法，具体涉及一种基于COⅠ基因鉴别绵羊毛与山羊毛的方法。

背景技术

山羊毛与绵羊毛都是市场上常见的用于纺织的动物毛纤维，山羊毛制品和绵羊毛制品在手感、质感等方面略有差别，以满足不同需求。然而，由于山羊毛和绵羊毛的结构和组成非常相似，且经过一系列的加工工艺后二者更加难以辨别，因此对山羊毛和绵羊毛进行鉴别就显得尤为重要。目前的鉴别方法主要是外观鉴别法，即在显微镜下根据其鳞片层、皮质层和髓质层的特征加以辨别。但是在纺织物制造的过程中，毛发的形态结构会受到一定程度的破坏，此方法不仅辨别难度较大，而且主观性过强，比对标准不明确，对辨别人员的经验和技术要求较高，不容易快速得出准确结果。

动物毛发的基因组大多存在于毛囊中，而用于纺织的动物毛发通常没有毛囊，因而在对毛发DNA进行分析时，主要是针对毛发干中的线粒体DNA。CO Ⅰ基因是动物线粒体DNA上的基因，广泛用于动物物种鉴定。

发明内容

为了解决背景技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种基于COⅠ基因鉴别绵羊毛与山羊毛的方法，该方法具有准确可靠、快速高效、特异性强、灵敏度高的优点。

本发明方法特异性强，简单易操作，避免了传统外观鉴定的主观因素影响，且可鉴别经纺织加工后外观改变难以从形态上进行识别的羊毛制品，结果客观准确，可信度高。

基于上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

(1)提取羊毛的DNA；

(2)利用COⅠ基因引物对提取到的DNA进行PCR扩增，扩增出380bp 长度的PCR扩增产物；

(3)将PCR扩增产物经质量浓度为2％的琼脂糖凝胶电泳检测后，利用胶纯化试剂盒回收，测序得到测序结果，根据测序结果进行绵羊毛与山羊毛的物种鉴别。

所述步骤(2)中，COⅠ基因引物包括【上游的】GS380-F核苷酸序列和【下游的】GS380-R核苷酸序列，GS380-F核苷酸序列如SEQ ID NO.1，【具体为ATCGGCACCCTCTACCTTCT，】GS380-R核苷酸序列如SEQ ID NO.2【，具体为GCTCCTGCATGGGCTAGATT】。

所述步骤(2)中，PCR扩增的反应体系为：加入5μl羊毛DNA、0.5μl的浓度为10μmol/L的上游引物GS380-F、0.5μl的浓度为10μmol/L的下游引物 GS380-R、2μl Taq酶缓冲液、2μl dNTP混合液、0.5μl Taq酶溶液，用ddH₂O将总体积补足至20μl；扩增条件为：94℃预变性1min；94℃变性30s、55℃退火 30s、72℃延伸1min，共35个循环；72℃延伸5min；最后温度设置4℃【且时间设置∞以实现扩增结束后的暂时性低温】保存。

【所述的Taq酶缓冲液、dNTP混合液、Taq酶溶液分别采用TaKaRa 10x Ex TaqBuffer、TaKaRa dNTP Mixture、TaKaRa Ex Taq酶。】

所述步骤(3)中，根据测序结果进行比对判断：

若测序结果的序列为SEQ ID NO.3，则羊毛为绵羊毛；

若测序结果的序列为SEQ ID NO.4，则羊毛为山羊毛。