[发明专利]一种树突细胞靶向的杂化树状大分子/YTHDF1 siRNA复合物及其制备和应用

说明书

本发明涉及一种树突细胞靶向的杂化树状大分子/YTHDF1siRNA复合物及其制备方法和应用。该方法包括：G5.NHsubgt;2/subgt;‑Man制备，G5.NHsubgt;2/subgt;‑Man‑PS制备，{(Ausupgt;0/supgt;)subgt;25/subgt;‑G5.NHsubgt;2/subgt;‑Man‑PSsubgt;20/subgt;}DENPs制备，树突细胞靶向的杂化树状大分子/YTHDF1siRNA复合物制备。该方法操作工艺简单，反应条件温和；制备得到的复合物能高效被树突细胞所吞噬并不影响树突细胞活力，能实现树突细胞转染并沉默YTHDF1的表达，用于增强肿瘤免疫治疗。

技术领域

本发明属于肿瘤免疫治疗杂化纳米材料及其制备和应用领域，特别涉及一种树突细胞靶向的杂化树状大分子/YTHDF1 siRNA复合物及其制备方法和应用。

背景技术

免疫疗法因其在肿瘤根除和预防复发方面的强大效果，已成为近年来最热门的肿瘤治疗策略之一。免疫疗法可以通过提高自身免疫敏感性来杀死肿瘤细胞，并且比传统治疗方法具有更低的毒性和更长的疗效。肿瘤新生抗原在产生自发的抗肿瘤免疫反应和预测免疫治疗的临床反应中具有重要作用。尽管患者体内存在大量新生抗原，但由于未能获得足够和持久的抗肿瘤免疫应答，完全治愈肿瘤基本上很难达成。有研究发现，YTHDF1蛋白(一种RNA m⁶A甲基化重要的阅读器蛋白)在树突细胞参与的抗肿瘤免疫过程中发挥重要作用，其基因缺失能有效增强树突细胞向CD8+T杀伤性细胞交叉呈递肿瘤抗原的能力，从而增强体内抗肿瘤免疫反应(Han et al.,Nature,2019,566(7743),270)。该研究表明YTHDF1是肿瘤免疫治疗的一个潜在治疗靶点。因此，进一步对树突细胞进行YTHDF1的基因沉默有望用于增强肿瘤免疫治疗。其中，siRNA介导的RNA干扰是一种高效可行的基因沉默手段，可以通过寻找一种稳定、安全、高效的纳米载体体系负载siRNA诱导YTHDF1基因沉默，从而增强肿瘤抗原交叉提呈，提高机体免疫反应，实现对肿瘤更为高效的免疫治疗。

聚酰胺-胺(PAMAM)树状大分子由于其典型的结构特征，包括单分散性、三维立体结构、表面可多功能化等，被广泛应用于生物医学领域，也被视为具有优良基因传递效率的非病毒载体之一。研究表明，PAMAM树状大分子一方面可以通过质子海绵效应从溶酶体中逃逸，保护基因不被溶酶体中的各种酶降解(Hou et al.,J.Mater.Chem.B,2016,4(17)2933-2943)。另一方面，其表面具有大量的氨基，赋予了它强大的基因压缩能力，同时可以进行不同的功能化，能够与其它分子产生物理或化学的作用，内部的空腔可以负载药物或无机纳米颗粒，并可进行表面聚乙二醇化修饰来降低细胞毒性并提高基因转染效率(Shan etal.,Biomaterials,2012,33(10),3025-3035；Kong L,et al.,Nanomedicine,2016,12(23),3103-3115)。此外，树状大分子包裹纳米金颗粒可用来压缩PD-L1 siRNA，转染诱导肿瘤组织中的PD-L1沉默，以恢复T细胞活力，增强肿瘤免疫治疗效果(Xue et al.,Sci.ChinaMater.,2021,DOI:10.1007/s40843-020-1591-1)。但目前这些研究并没有选择树突细胞作为新的研究的靶点，未尝试对其进行基因转染，并用于肿瘤的免疫治疗中。

根据国内外文献检索结果，目前尚未发现关于树突细胞靶向的树状大分子包裹纳米金颗粒/YTHDF1 siRNA复合物的制备及其在沉默树突细胞的YTHDF1基因及其免疫治疗等应用中的相关报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种树突细胞靶向的杂化树状大分子/YTHDF1siRNA复合物及其制备方法和应用，以填补现有技术的空白。