[发明专利]一种脾氨肽的制备方法

说明书

本发明公开了一种脾氨肽的制备方法，包括对猪脾脏冻干粉碎、加水磨匀浆后破壁、酶解、灭酶、过滤、纯化、冻干等步骤。本发明提供的脾氨肽的制备方法可制得分子量在180‑500道尔顿、含量高达99%以上的脾氨肽产品，并且具有较高的收率，口感好，无苦味，能够方便的添加在食品及保健品中，易于被人体吸收，并且操作方法简便，生产周期短，大大提高了生产效益，适用于大规模生产。

技术领域

本发明属于生化制药技术领域，具体涉及一种脾氨肽的制备方法。

背景技术

脾脏是机体最大的免疫器官，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，占全身淋巴组织总量的25％左右，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。脾内的大量巨噬细胞可以清除衰老的血细胞、抗原和异物。

以动物脾脏为原料生产的脾氨肽能增加服用者CD₃细胞的数量，促进T淋巴细胞活性，从而对T淋巴细胞介导的细胞免疫发挥作用。因此，脾氨肽作为免疫体调节剂，能改善细胞免疫功能低下所引起的损伤机体健康的多种状况，提高机体免疫力。脾氨肽作为免疫体调节剂可用于反复呼吸道感染、支气管炎、哮喘、肺炎、癌症等病症的辅助治疗，目前主要用于对病毒性感染及自身免疫性疾病的治疗。

我国的家禽类养殖工业发达，尤其是生猪养殖，猪肉需求高，屠宰量大，大量的猪脾脏不能加以利用被丢弃浪费。

目前有相关文献、专利报道了以动物脾脏为原料制备脾氨肽的方法，但是这些方法仍存在细胞破碎不完全，有效物质不能得到有效释放，从而导致脾氨肽提取率低，有害物质不能有效去除，产品纯度低，提取物分子量偏大，以及提取过程中使用有机溶剂等问题。文献“刘庆涛，余蓉*，崔瑜霞，等，猪脾脏多肽的酶法制备及其生物活性研究[J].食品与药品，2010，(5)：161-164.”中使用猪脾脏制备脾氨肽，制备工艺为：脾匀浆-乙醚脱脂-酶解-终止反应-离心-酶解液-多肽粗品-离子交换层析，该方法提取的多肽粗品经纯化后获得脾多肽含量仅为2.12mg/g，且在制备过程中存在有机溶剂引入问题。公告号为CN103194513B的专利中以动物脾脏为原料使用透析法进行脾氨肽的制备，该方法虽然操作简便，制备效率高，但是提取物的分子量偏大，无法吸收利用。因此对脾氨肽的制备工艺进行研究具有重要意义。

发明内容

发明目的：为了解决现有技术的问题，本发明的发明目的在于提供了一种产品收率高、纯度高并且易于吸收利用的脾氨肽的制备方法。

具体技术方案如下：

本发明提供了一种脾氨肽的制备方法，主要操作步骤为：

(1)将新鲜猪脾脏冷冻后粉碎，作为原料；

(2)向原料中加入纯化水，搅拌均匀，胶体磨匀浆后破壁；

(3)向步骤(2)制得的破壁后的匀浆中依次加入脂肪酶A、脂肪酶B、蛋白酶A及蛋白酶B对原料进行酶解，最后再高温灭酶活性；

(4)将步骤(3)灭酶后的混合液离心过滤，滤液依次进行脱脂纯化、纳滤膜过滤、纳滤膜脱盐、离子过滤器纯化、浓缩器浓缩，得到浓缩液体；

(5)将步骤(4)制得的浓缩液在低温真空环境下进行冷冻、解析冻干后即可得脾氨肽冻干产品。

进一步地，上述方法中步骤(1)中新鲜猪脾脏的冷冻温度为-25℃--15℃。

进一步地，上述方法中步骤(2)中纯化水的质量为原料的3-5倍。

进一步地，上述方法中步骤(3)中加入的脂肪酶A为微生物脂肪酶。

进一步地，上述方法中步骤(3)中加入的脂肪酶B选自固定化脂肪酶TLIM、TLRM、Novozyme 435中的一种或多种。

进一步地，上述方法中步骤(3)中加入的蛋白酶A选自栖土曲霉、无花果蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶一种或多种；