[发明专利]一种脾氨肽的制备方法

权利要求书

1.一种脾氨肽的制备方法，其特征在于，包含以下步骤：

（1）将新鲜猪脾脏冷冻后粉碎，作为原料；

（2）向原料中加入纯化水，搅拌均匀，胶体磨匀浆后破壁；

（3）向步骤（2）制得的破壁后的匀浆中依次加入脂肪酶A、脂肪酶B、蛋白酶A及蛋白酶B对原料进行酶解，最后再高温灭酶活性；

（4）将步骤（3）灭酶后的混合液离心过滤，滤液依次进行脱脂纯化、纳滤膜过滤、纳滤膜脱盐、离子过滤器纯化、浓缩器浓缩，得到浓缩液体；

（5）将步骤（4）制得的浓缩液在低温真空环境下进行冷冻、解析冻干后即得脾氨肽冻干产品。

2.根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（1）中新鲜猪脾脏的冷冻温度为-25℃~-15℃。

3.根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，纯化水的质量为原料的3-5倍。

4. 根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中加入的脂肪酶A为微生物脂肪酶；脂肪酶B选自固定化脂肪酶选自TLIM、TLRM、Novozyme 435中的一种或多种。

5.根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）中加入的蛋白酶A选自栖土曲霉、无花果蛋白酶、复合风味蛋白酶、木瓜蛋白酶或菠萝蛋白酶一种或多种；蛋白酶B为猪肠/鸡肠复合消化道蛋白酶。

6.根据权利要求5所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，所述猪肠/鸡肠复合消化道蛋白酶的制备工艺为：将猪肠与鸡肠洗净，按猪肠：鸡肠质量比为1：1-1.2的比例制成匀浆，加入匀浆重量5-10倍量的0.5-1wt％的NaCl溶液，在4～6℃下超声1～2h后离心分离，将上清液透析除盐后冷冻干燥，即得猪肠/鸡肠复合消化道蛋白酶。

7.根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（3）的具体步骤为：将步骤（2）制得的破壁后的匀浆升温至30-35℃，加入原料质量0.3-0.5%的微生物脂肪酶，保温0.5-1h，再升温至50-60℃，加入原料质量0.3-0.5%固定化脂肪酶和1-1.5%的蛋白酶A，保温0.5-1h，再加入0.3-0.5%蛋白酶B，保温3-4h后，最后升温至90-95℃，灭酶活性，保持15-30分钟。

8. 根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法， 其特征在于，步骤（4）中，使用卧锣离心机进行离心过滤，控制离心机的转速为3400-3800r/min；脱脂纯化使用三相离心机；纳滤膜过滤中所使用的纳滤膜孔径为0.4-0.5nm；纳滤膜脱盐中所使用的纳滤膜孔径为0.18-0.22nm。

9.根据权利要求8所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（4）的具体步骤为：将步骤（3）灭酶后的混合液用卧锣离心机过滤，控制转速3400-3800r/min，滤液再用三相离心机脱脂纯化，得到的脱脂纯化液先用孔径为0.4-0.5nm的纳滤膜在纳滤机上过滤，再用孔径为0.18-0.22nm的纳滤膜脱盐，最后用离子过滤器进一步纯化，所得纯化液用双效浓缩器进一步浓缩。

10.根据权利要求1所述的脾氨肽的制备方法，其特征在于，步骤（5）的具体步骤为：将步骤（4）制得的浓缩液在-40℃--35℃下冷冻1.25-1.35小时，再在-45--40℃、0.10-0.15mbar的真空度下冻干7-8小时，然后在-30℃--10℃、0.15mbar-0.25mbar的真空度下解析冻干3-4小时，即得脾氨肽冻干产品。