[发明专利]一种提升菌体生长和产生物酶潜力的基因表达盒

权利要求书

1.一种启动子，其特征在于，所述启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示。

2.一种基因表达盒，其特征在于，所述基因表达盒包括如权利要求1中所述的启动子，以及以所述启动子启动表达的角蛋白酶基因；所述角蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQ IDNO .2所示。

3.一种含权利要求2所述的基因表达盒的载体质粒。

4.根据权利要求3所述的载体质粒，其特征在于，所述载体为适于芽孢杆菌表达的载体。

5.一种表达角蛋白酶的重组菌，其特征在于，所述重组菌以权利要求1所述的启动子启动表达角蛋白酶基因；所述角蛋白酶基因的核苷酸序列如SEQ ID NO .2所示。

6.根据权利要求5所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌的宿主为枯草芽孢杆菌。

7.一种如权利要求5或6所述的重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）以枯草芽孢杆菌基因组为模板，扩增启动子序列，并将两个拷贝数的启动子序列进行串联、将-35区的ATGATA突变为TTGACA、将-10区的TAAAAT突变为TATAAT，得到核苷酸序列如SEQ ID NO .1所示的启动子；

（2）将步骤（1）所得启动子片段回收后构建到携带如SEQ ID NO .2所示的角蛋白酶基因的质粒中得到重组质粒；

（3）将步骤（2）所得重组质粒转化到宿主菌中，得到所述重组菌。

8.一种如权利要求5或6所述的重组菌生产角蛋白酶的方法，其特征在于，将所述重组菌以3~10％接种量接种到发酵罐中，以发酵温度30~40℃、转速100~500 rpm、通气量为1~3vvm、pH为6.5~7.5的条件下发酵生产，得到所述角蛋白酶。

9.一种如权利要求1所述的启动子在提高具有宿主毒性的蛋白酶高效表达和生产中的应用。