[发明专利]一组检测核酸的DNAzyme探针及其应用

权利要求书

1.一组检测核酸的DNAzyme探针，包含：酶链H1、底物链H2、酶链H3和底物链H4；

所述酶链H1从5’到3’依次包括：A序列、B序列、C序列、D序列和E序列；

所述E序列与目标核酸互补；

所述D序列为TAG、AAG、ATG、TTG或GCG；

所述C序列为ATAGTGGG、AAAGTGGG、ATAGTGGG、TTAGTGGG或GCAGTGGG；

所述B序列为基于DNAzyme探针对应金属离子的DNAzyme催化活性中心；

所述A序列与E序列5’端的第2～18位碱基互补；

所述底物链H2从5’到3’依次包括：F序列、G序列、H序列、I序列和J序列；

所述F序列为ACCAGCCGCAAAT（SEQ ID NO.13）或ATAGGGTCATGCT（SEQ ID NO.14）；

所述G序列与所述C序列互补；

所述H序列为两个核糖核苷酸；

所述I序列与所述A序列的3’端互补配对；

所述J序列与所述F序列及G序列的第一位碱基连接而成的序列互补；

所述底物链H2的5’端和3’端分别标记有荧光基团和荧光淬灭基团；

所述酶链H3从5’到3’依次包括：K序列、B序列、L序列、M序列和N序列；

所述N序列与所述F序列与所述G序列连接而成的序列互补；

所述M序列为TTTAT；

所述L序列与目标核酸的3’端互补；

所述K序列与所述M序列3’端的第1位碱基与所述N序列5’端的第1～16位碱基连接而成的序列互补；

所述底物链H4从5’到3’依次包括：O序列、H序列、P序列和Q序列；

所述O序列与所述E序列互补；

所述P序列与所述K序列的3’端互补；

所述Q序列与所述目标核酸的5’端的第1～17位碱基互补；

所述底物链H4的5’端和3’端分别标记有荧光基团和荧光淬灭基团；

所述金属离子为锌离子、锰离子和铜离子中的至少一种。

2.根据权利要求1所述的检测核酸的DNAzyme探针，其特征在于：

所述核酸为miR-373，所述金属离子为锌离子时，所述酶链H1的序列为GCTTCGATTTTGGGGTGTCCGAGCCGGTCGAAATAGTGGGTAGACACCCCAAAATCGAAGCACTTC（SEQ ID NO.1）；

所述底物链H2的序列为ACCAGCCGCAAATCCCACTAT/rA//rG/CACCCCAAGATTTGCGGCTGGT（SEQ ID NO.2）；

所述酶链H3的序列为CCGCAAATCCCACTATATCCGAGCCGGTCGAAACACCCCAATTTATATAGTGGGATTTGCGGCTGGT（SEQ ID NO.3）；

所述底物链H4的序列为GAAGTGCTTCGATTTTGGGGTGT/rA//rG/TATAGTGGCAAAATCGAAGCACTTC（SEQ ID NO.4）。

3.一种检测核酸的纳米颗粒，包含：

权利要求1～2中任一项所述的DNAzyme探针；和

金属有机框架材料；

所述金属有机框架材料中的金属离子为DNAzyme探针对应金属离子。

4.根据权利要求3所述的纳米颗粒，其特征在于：

所述金属有机框架材料为ZIF-8、ZIF-90、ZPF-2、Mn-TCPP、Cu-TCPP和NU-110（Cu）中的至少一种。

5.一种检测核酸的纳米颗粒的制备方法，其特征在于：

将权利要求1～2中任一项所述的DNAzyme探针和有机配体混合，加入可溶性金属盐，得到纳米颗粒；

所述有机配体为硝基咪唑、醛基咪唑、氨基咪唑、2-甲基咪唑、四羧基苯卟啉和苯三甲酸盐中的至少一种；

所述可溶性金属盐为醋酸锌、硝酸锌、氯化锰和硝酸铜中的至少一种。

6.一种试剂盒，包含：权利要求1～2中任一项所述的DNAzyme探针和/或权利要求3～4中任一项所述的纳米颗粒。