[发明专利]一种托吡司特中两个基因毒性杂质的分离和测定方法

说明书

本发明公开了一种托吡司特中两个基因毒性杂质的分离和测定方法，包括以下步骤：取托吡司特适量，置于容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释，作为供试品溶液；分别取TP02‑IMP‑A和TP‑IMP‑A对照品适量，置于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释，作为对照品溶液；精密量取供试品溶液和对照品溶液各50μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；分别取托吡司特、TP02‑IMP‑A和TP‑IMP‑A对照品各适量，置于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释，作为系统适用性溶液；精密量取50μL系统适用性溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，相邻色谱峰之间的分离度应不小于1.5。本发明的托吡司特的检测方法线性关系良好，重复性高，结果准确灵敏、稳定可靠，适用范围广。

技术领域

本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种托吡司特中两个基因毒性杂质的分离和测定方法。

背景技术

托吡司特是一个新型的黄嘌呤氧化酶（XOR）抑制剂，选择性和可逆性地抑制XOR的合成，从而在嘌呤代谢的过程中抑制尿酸的产生，对痛风起到治疗作用。托吡司特的中文名为：4-[5-（吡啶-4-基）-1H-1，2，4三氮唑-3-基]吡啶-2-腈，英文名为：4-[5-(pyridin-4-yl)-1H -1,2,4-triazol-3-yl]pyridine-2-carbonitrile，其化学结构式如下：

基因毒性杂质是指能直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用的物质。在药物活性物质中没有出现的基因毒性反应物和有基因毒性结构的物质，被称为潜在基因毒性杂质。在生产过程中，可能产生基因毒性杂质的环节包括新药合成、原料药纯化、储存运输（与包装物接触）等，故在新药合成阶段应该指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化学物质并采取有效的分析方法进行研究和控制。

在托吡司特的合成中，存在TP02-IMP-A和TP-IMP-A两个中间体，均含有肼的化学式结构，化学结构式分别如下：

TP02-IMP-A：

TP-IMP-A：

目前托吡司特片尚未在国内上市，未被各国药典收录，未见关于杂质TP02-IMP-A和TP-IMP-A的检测文献报道。为了控制托吡司特的质量，保证用药的安全性，需要在托吡司特中对这2个基因毒性杂质进行严格控制。本发明对分离测定托吡司特中两个基因毒性杂质的高效液相色谱方法进行了摸索。

发明内容

本发明的目的是提供一种托吡司特中两个基因毒性杂质的分离和测定方法，解决上述现有技术问题中的一个或者多个。

本发明提供的一种托吡司特中两个基因毒性杂质的分离和测定方法，包括以下步骤：

（1）取托吡司特适量，置于容量瓶中，加稀释剂溶解并稀释，作为供试品溶液；分别取TP02-IMP-A和TP-IMP-A对照品适量，置于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释，作为对照品溶液；

（2）精密量取供试品溶液和对照品溶液各50μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图；

（3）分别取托吡司特、TP02-IMP-A和TP-IMP-A对照品各适量，置于容量瓶中，用稀释剂溶解并稀释，作为系统适用性溶液；

（4）精密量取50μL系统适用性溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，相邻色谱峰之间的分离度应不小于1.5。

在某些实施方案中，稀释剂为磷酸与乙腈的混合液，其中：磷酸的质量百分含量为1%，磷酸与乙腈的体积比为90:10。

在某些实施方案中，高效液相色谱仪测定时采用梯度洗脱。

在某些实施方案中，流动相包括流动相A和流动相B，流动相A为1%磷酸，流动相B为乙腈。

在某些实施方案中，梯度洗脱的程序如下表所示：

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