[发明专利]一种高效分离猪肺炎支原体的方法有效
| 申请号： | 202110792367.1 | 申请日： | 2021-07-14 |
| 公开（公告）号： | CN113444666B | 公开（公告）日： | 2023-05-30 |
| 发明（设计）人： | 宗冰冰;张焱焱;任明星;刘宇;付书林;叶纯;吴仲元;邱银生 | 申请（专利权）人： | 武汉轻工大学 |
| 主分类号： | C12N1/20 | 分类号： | C12N1/20;C12N1/02;C12R1/35 |
| 代理公司： | 武汉领君知识产权代理事务所(普通合伙) 42248 | 代理人： | 汪俊锋 |
| 地址： | 430023 湖北省*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 分离 肺炎 支原体 方法 | ||
1.一种高效分离猪肺炎支原体的方法，其特征在于：所述的方法为使用含左氧氟沙星的培养基对猪肺炎支原体进行纯化培养；
所述的左氧氟沙星的浓度为128μg/mL，所述的培养基为Friis培养基；
所述的纯化培养为通过传代培养进行纯化，所述的传代培养的次数为六代，在第四代时转接比例为1:10000～1:100000。
2.根据权利要求1所述的高效分离猪肺炎支原体的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将取自患有呼吸道疾病的病猪肺组织的样本处理后，转接到含左氧氟沙星的液体培养基中培养；
（2）步骤（1）的样本培养六天后，将第一代培养物转接到新的含左氧氟沙星的液体培养基中进行第二代培养，以此类推第六代培养产物涂到含左氧氟沙星的固体培养基上，待长出单克隆后，用接种丝挑取单菌落在固体培养基上划线，待长出新的单菌落，再重新挑取单菌落划线，重复多次，最后挑取单克隆于液体培养基中，即分离纯化到猪肺炎支原体。
3.根据权利要求2所述的高效分离猪肺炎支原体的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的样本处理为将样本置于PBS中，剪碎后再研磨，离心，上清液使用滤器过滤除菌。
4.根据权利要求1所述的高效分离猪肺炎支原体的方法，其特征在于：包括如下步骤：
（1）将取自患有呼吸道疾病的病猪肺组织的样本置于装有PBS的2mL离心管中，剪碎后再研磨，于4℃、5000r/min离心5min，上清液使用0.45μm滤器过滤除菌，按1:4转接到含左氧氟沙星128μg/mL的液体培养基中培养；
（2）步骤（1）的样本培养六天后，将第一代培养物按1:4转接到含左氧氟沙星128μg/mL的液体培养基中进行第二代培养，以此类推；传代至第四代时将第三代培养物按1:10000～1:100000转接到含左氧氟沙星128μg/mL的液体培养基中培养六天；将第四代培养物按1:10转接到新的含左氧氟沙星128μg/mL的液体培养基中培养六天，以此类推，第六代培养产物涂到含左氧氟沙星128μg/mL的固体培养基上，待长出单克隆后，用接种丝挑取单菌落在固体培养基上划线，待长出新的单菌落，再重新挑取单菌落划线，重复三次，最后挑取单克隆于液体培养基中，即分离纯化到猪肺炎支原体。
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