[发明专利]一种能降解玉米赤霉烯酮的水解酶的突变体构建方法及其应用有效
| 申请号： | 202110789525.8 | 申请日： | 2021-07-13 |
| 公开（公告）号： | CN113564143B | 公开（公告）日： | 2023-08-25 |
| 发明（设计）人： | 夏雨;吴梓凤;何瑞;秋杨煜;程倩倩;王周平 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/18 | 分类号： | C12N9/18;C12N15/55;C12N15/10;C12N15/81;A23L5/20;C12R1/645 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 仇钰莹 |
| 地址： | 214000 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 降解 玉米 赤霉烯酮 水解 突变体 构建 方法 及其 应用 | ||
1.一种降解率提高的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上，将第103位丝氨酸突变为丙氨酸。
2.根据权利要求1所述的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，还进行了（a）或（b）所示突变：
（a）将第172位缬氨酸突变为精氨酸；
（b）将第248位组氨酸突变为谷氨酸。
3.根据权利要求1所述的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，在SEQ ID NO.1所示氨基酸序列的基础上，将第103位丝氨酸突变为丙氨酸，并将第172位缬氨酸突变为精氨酸，并将第248位组氨酸突变为谷氨酸。
4.根据权利要求1所述的所述的玉米赤霉烯酮水解酶突变体，其特征在于，在SEQ IDNO.1所示氨基酸序列的基础上，将第103位丝氨酸突变为丙氨酸，并将第172位缬氨酸突变为精氨酸，并将第205位甘氨酸突变为谷氨酰胺，并将第248位组氨酸突变为谷氨酸。
5.编码权利要求1~4任一所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体的基因。
6.一种制备权利要求1~4任一所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体的方法，其特征在于，培养表达权利要求1~4任一所述玉米赤霉烯酮水解酶突变体的重组微生物细胞，收集重组微生物细胞内或培养上清液中的玉米赤霉烯酮水解酶。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述突变体的构建方法为：以含有玉米赤霉烯酮水解酶基因的重组质粒为模板，通过PCR引入玉米赤霉烯酮水解酶突变位点，然后将突变后的重组质粒转化到宿主细胞内，获得表达玉米赤霉烯酮水解酶突变体的重组微生物细胞。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法是将重组微生物细胞在培养基中培养至OD600达到1.0时，转接至YEPG诱导培养基中，于28~30℃、150~300 rpm诱导72~120 h产酶。
9.权利要求1~4任一所述的玉米赤霉烯酮水解酶突变体在降解玉米赤霉烯酮中的应用。
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