[发明专利]一种抗体纳米粒子及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种抗体纳米粒子及其制备方法和应用，属于医药技术领域。本发明提供的抗体纳米粒子，包括聚乙二醇化抗HER‑2纳米抗体和与所述聚乙二醇化抗HER‑2纳米抗体通过化学键合的HCC纳米颗粒；所述HCC纳米颗为人血清白蛋白封装的二氢卟吩和过氧化氢酶。本发明提供的抗体纳米粒子实现了光敏剂的深部肿瘤靶向传递，能够诱导催化供氧并降低SK‑OV‑3细胞中HIF‑1α的表达，改善肿瘤乏氧微环境，诱导DCs成熟，在660nm激光下，基于抗体纳米粒子的PDT与抗CTLA‑4治疗可以抑制远处卵巢癌肿瘤的生长，防止肿瘤转移。

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种抗体纳米粒子及其制备方法和应用。

背景技术

卵巢癌是女性生殖系统的一种恶性肿瘤，发病率和死亡率都很高。目前，卵巢癌的主要治疗方案是化疗、放疗和手术治疗；然而，上述方法的局限性是容易复发，从而降低了患者的生存期。乏氧是实体瘤的典型特征，乏氧有助于卵巢癌的肿瘤侵袭和转移，还会增加线粒体裂变程度，降低卵巢癌细胞对化疗药物如顺铂的敏感性，从而导致对放疗、化疗的抵抗，从而直接限制多种临床肿瘤治疗方案的疗效。

光动力疗法(PDT)治疗卵巢等肿瘤的新兴疗法，具有诸多优点，主要包括两个过程：首先把光敏剂输送到肿瘤位置；然后用特定波长的光来激发光敏剂，将能量传递给周围的分子氧，产生细胞毒性活性氧(Reactive oxygen species，ROS)，能够对肿瘤细胞和微血管造成不可逆的损伤，继而引发大量的炎症和免疫反应，这种连锁机制能够实现对肿瘤的长期抑制作用。但存在以下问题：既往的光敏剂对深部肿瘤的靶向性差，副作用较大；光传播深度有限；肿瘤内普遍存在的乏氧会减弱PDT的治疗效果并加重治疗后的乏氧。开发改善肿瘤乏氧、靶向肿瘤成像与治疗一体化的纳米探针是解决上述问题的方法之一。

纳米抗体(Nb)是一种天然单域抗体，是目前已知最小的功能性抗原特异性结合片段，易于通过基因工程生产。Nb在室温下具有高特异性、高亲和力、低免疫原性、高溶解性和高稳定性、组织渗透能力强，从而提高药物递送系统的功效。与传统抗体相比，Nb在靶向药物传递和肿瘤靶向方面具有优势，具有巨大的临床应用潜力，可以提高PDT中靶向深部组织肿瘤的性能。但是Nb血液清除速度快，限制了治疗应用，聚乙二醇化和与纳米颗粒结合是延长其血液半衰期的方法之一。HER2在大多数上皮性卵巢癌中呈过度表达，因此抗HER2-Nb结合光敏剂可以提高位于盆腔深部的卵巢癌的靶向性。

肿瘤的缺氧微环境是一个复杂的因素，它可能介导肿瘤对各种治疗应用的抵抗力。现有的光动力疗法用传统的光敏剂治疗后会加剧肿瘤的缺氧环境，对于卵巢癌肿瘤细胞的PDT治疗效果有限。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种抗体纳米粒子及其制备方法和应用，本发明提供的抗体纳米粒子可以改善肿瘤乏氧和促进免疫原性光动力疗法治疗卵巢癌，对于卵巢癌肿瘤细胞抑制效果优异。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种抗体纳米粒子，包括聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体和与所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体通过化学键合的HCC纳米颗粒；

所述HCC纳米颗为人血清白蛋白封装的二氢卟吩和过氧化氢酶；

所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体由包括以下步骤的方法制备得到：构建质粒，将所述质粒转化到大肠杆菌Rosetta-gami^TM 2感受态细胞中诱导蛋白质表达，得到纳米抗体；所述质粒为N端为具有His6标签，C端为GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的质粒，所述序列中包含未配对的半胱氨酸和微生物转谷氨酰胺酶结合的LLQS；将微生物转谷氨酰胺酶添加到含有所述纳米抗体、抗坏血酸和PEG-NH₂的磷酸盐缓冲溶液中，启动Nb的位点特异性聚乙二醇化，得到聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体。

优选的，所述启动Nb的位点特异性聚乙二醇化后还包括纯化，所述纯化包括：利用α-氨基乙硫醇盐酸盐预处理后进行纯化。