[发明专利]一种抗体纳米粒子及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种抗体纳米粒子，包括聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体和与所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体通过化学键合的HCC纳米颗粒；

所述HCC纳米颗为人血清白蛋白封装的二氢卟吩和过氧化氢酶；

所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体由包括以下步骤的方法制备得到：构建质粒，将所述质粒转化到大肠杆菌Rosetta-gami^TM 2感受态细胞中诱导蛋白质表达，得到纳米抗体；所述质粒为N端为具有His6标签，C端为GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的质粒，所述序列中包含未配对的半胱氨酸和微生物转谷氨酰胺酶结合的LLQS；将微生物转谷氨酰胺酶添加到含有所述纳米抗体、抗坏血酸和PEG-NH₂的磷酸盐缓冲溶液中，启动Nb的位点特异性聚乙二醇化，得到聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体。

2.根据权利要求1所述的抗体纳米粒子，其特征在于，所述启动Nb的位点特异性聚乙二醇化后还包括纯化，所述纯化包括：利用α-氨基乙硫醇盐酸盐预处理后进行纯化。

3.根据权利要求1或2所述的抗体纳米粒子，其特征在在于，所述抗体纳米粒子中HCC纳米颗粒的质量分数为80～95％。

4.根据权利要求1所述的抗体纳米粒子，其特征在在于，所述HCC纳米颗粒中二氢卟吩、过氧化氢酶和人血清白蛋白的质量比为0.5～1.5：0.5～1.5：3～5。

5.权利要求1～4任一项所述的抗体纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

构建质粒，将所述质粒转化到大肠杆菌Rosetta-gami^TM 2感受态细胞中诱导蛋白质表达，得到纳米抗体；所述质粒为N端为具有His6标签，C端为GGGGS-CCC-GSGSGS-LLQS序列的质粒，所述序列中包含未配对的半胱氨酸和微生物转谷氨酰胺酶结合的LLQS；

将微生物转谷氨酰胺酶添加到含有所述纳米抗体、抗坏血酸和PEG-NH₂的磷酸盐缓冲溶液中，启动Nb的位点特异性聚乙二醇化后纯化，得到聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体；

将人血清白蛋白、谷胱甘肽和水混合，去除水后加入二氢卟吩和过氧化氢酶进行偶联，然后加入乙醇形成二硫键，得到HCC纳米颗粒；

利用5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)对HCC纳米颗粒进行活化，得到活化HCC纳米颗粒；

将所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体和活化HCC纳米颗粒进行化学键合，得到抗体纳米粒子。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述HCC纳米颗粒与5,5'-二硫代双(2-硝基苯甲酸)的质量比为1：2～4。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇化抗HER-2纳米抗体和活化HCC纳米颗粒的质量比为1：0.7～0.9。

8.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述化学键合的温度为10～30℃，时间为2～4h。

9.权利要求1～4任一项所述的抗体纳米粒子或权利要求5～8任一项所述制备方法得到的抗体纳米粒子在制备治疗卵巢肿瘤药物中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述治疗卵巢肿瘤药物包括光动力疗法治疗卵巢肿瘤药物和/或免疫疗法治疗卵巢肿瘤药物。