[发明专利]一种苯丙烷代谢途径代谢物的液质联用分析方法及应用

权利要求书

1.一种苯丙烷类代谢物的液质联用分析方法，其特征在于：苯丙烷代谢途径中具有合成关系的代谢物，以苯环上的羟基或甲氧基取代基做纵向分类标准，以骨架连接特点形成的化合物种类做横向分类标准，建立苯丙烷类代谢物结构周期表，上述苯丙烷类代谢物共103个化合物，其中包括62个同分异构体，具体的包括18个苯丙烯酸类、苯丙酸类，85个香豆素类、二氢黄酮类、黄酮类、异黄酮类、二氢黄酮醇类、黄酮醇类、黄烷醇类、双黄酮类代谢物；

液质联用分析方法：使用液相色谱-电喷雾电离-三重四级杆质谱联用技术中的多反应监测方法分析103个化合物，最终以母离子与子离子种类及它们的保留时间作为定性依据，以特定子离子的丰度作为定量依据，其中化合物1-85使用液相色谱分离系统的具体参数如下：

①色谱柱型号: XBridge® BEH C18 2.5µm 3.0×150mm XP；

② 流动相有两种类型， 1) AB:流动相A是含有0.01%甲酸的甲醇，流动相B是含有0.01%甲酸的水溶液；或2) ab: 流动相a是乙腈，流动相b是含有0.01%甲酸的水溶液；

③当流动相为AB类型时，梯度洗脱程序为：0至5min内，流动相A由10%增至30%，B由90%降至70%；5-8min内，流动相A和B各维持30%和70%不变；8-18min内，流动相A由30%增至50%，B由70%降至50%；18-25min内，流动相A和B各维持50%不变；25-29min内，流动相A由50%增至70%，B由50%降至30%；29-33min内，流动相A和B维持100%不变；33-34min内，流动相A由100%降至10%，B 由0%增至90%；34-37min结束时，流动相A和B各维持10%和90%不变；

当流动相为ab时，梯度洗脱程序为：0至5min内，流动相a由10%增至30%，b由90%降至70%；5-8min内,流动相a和b各维持30%和70%不变；8-18min内，流动相a 由30%增至50%，b由70%降至50%；18-25min内，流动相a和b各维持50%不变；25-29min内，流动相a由50%增至70%，b由50%降至30%；29-30min内，流动相a由70%增至100%，流动相b由30%降至0%；30-32min内，流动相a由100%降至10%，B由0%增至90%；32-35.5min结束时，流动相A和B各维持10%和90%不变；流速为0.4ml/min；

④进样量1-5µl；⑤柱温40℃；

使用电喷雾电离系统的具体参数如下：①氮气温度：350℃；②气体流速：10L/min；③喷雾气压：45psi；④毛细管电压：+4000V；见表1：

表1. 85个代谢物的正离子多反应检测模式分析参数值

化合物86-103使用液相色谱分离系统的具体参数如下：①色谱柱型号是XBridge® BEHC18 2.5µm 3.0×150mm XP；②流动相A和B分别为甲醇和含有5mM甲酸铵和0.05%甲酸的水溶液；③梯度洗脱程序：0-1min内，流动相A和B各维持5%和95%不变；1-5min内，流动相A由5%增至30%，流动相B由95%降至70%；5-6min内，流动相 A和B各维持30%和70%不变；6-9min内，流动相A由30%增至100%，B由70%降至0%；9-12min内流动相A和B各维持100%和0%不变；12-12.5min内，流动相A由100%降至5%，B由0%增至95%；12.5-15.5min结束时，流动相A和B各维持5%和95%不变；流速为0.4ml/min；④进样量1-5µl；⑤柱温40℃；使用电喷雾电离系统的具体参数如下：氮气温度：350℃；气体流速：10L/min；喷雾气压：40psi；毛细管电压：-4000V；见表2：

表2. 18个代谢物的负离子多反应检测模式分析参数值

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2.一种根据权利要求1所述的方法在苯丙烷类代谢物分析中的应用，其特征在于：分析苯丙烷类代谢物在拥有苯丙烷代谢途径有机体内的变化趋势。

3.一种根据权利要求2所述的应用，其特征在于：分析银杏叶片中的苯丙烷代谢途径在一年中的含量变化趋势。

4.一种根据权利要求2所述的应用，其特征在于：分析大豆叶片受到盐和旱胁迫时苯丙烷类代谢途径的变化趋势。