[发明专利]骨桥蛋白的分离方法和分析方法

权利要求书

1.一种骨桥蛋白的分离方法，其特征在于，所述分离方法包括：采用色谱柱对含骨桥蛋白的待测试物进行HPLC分离，得到骨桥蛋白样品，

其中，所述色谱柱为Waters Protein-Pak Hi Res Q或Thermo Fisher ScientificProPacWAX-10；

采用梯度洗脱的方法进行所述HPLC分离，所述梯度洗脱的流动相包括流动相A和流动相B；所述流动相A和所述流动相B各自独立地为缓冲溶液，所述缓冲溶液选自三羟甲基氨基甲烷溶液、三羟甲基氨基甲烷盐酸盐溶液、氨基丁三醇溶液、磷酸氢二盐溶液、磷酸二氢盐溶液中的任意一种或多种，或它们中的任意一种或多种与氯化钠溶液、氯化钾溶液、氯化钙溶液、氯化镁溶液或氯化锂溶液的组合物；

在对所述含骨桥蛋白的待测试物进行HPLC分离之前采用三氯乙酸溶液对所述含骨桥蛋白的待测试物进行预处理，得到预处理后液；

所述梯度洗脱的过程包括：0～3min时所述流动相A的体积比由100％减少到15～25％、3～5min时所述流动相A的体积比由15～25％减少到5～15％、5～7min时所述流动相A的体积比保持5～15％不变、7～7.5min时所述流动相A由5～15％增加到45～55％、7.5～15min时所述流动相A的体积比保持45～55％不变。

2.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为：长度50～250mm，内径2～30mm，填充材料粒径2～20μm。

3.根据权利要求2所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为：长度50～150mm，内径2～10mm，填充材料粒径2～10μm。

4.根据权利要求3所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱的规格为：长度100mm，内径4.6mm，填充材料粒径5μm。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离方法，其特征在于，所述缓冲溶液为三羟甲基氨基甲烷溶液和氯化锂溶液、氯化钠溶液或氯化钾溶液的混合。

6.根据权利要求5所述的分离方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为7～9。

7.根据权利要求6所述的分离方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为7.05～8.5。

8.根据权利要求7所述的分离方法，其特征在于，所述缓冲溶液的pH值为8。

9.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述流动相A包括10～50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液和5～20mmol/L的氯化钠溶液。

10.根据权利要求9所述的分离方法，其特征在于，所述流动相A包括20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液和10mmol/L的氯化钠溶液；所述流动相B包括10～50mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液和100～800mmol/L的氯化钠溶液。

11.根据权利要求10所述的分离方法，其特征在于，所述流动相B包括20mmol/L的三羟甲基氨基甲烷溶液和800mmol/L的氯化钠溶液。

12.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.1～1mL/min。

13.根据权利要求12所述的分离方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.4mL/min。

14.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，进样量为1～50μL。

15.根据权利要求14所述的分离方法，其特征在于，进样量为5μL。

16.根据权利要求1所述的分离方法，其特征在于，柱温为20～40℃。