[发明专利]快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合及其应用

说明书

本发明公开了一组快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合及其应用，以期应用于杨梅叶片形态性状分子标记辅助选择。本发明提供一组可以快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合，为Y9766732，适用于荧光定量PCR仪等高通量分型检测平台，灵敏度高，可用于杨梅叶片形态性状的早期快速鉴定。本发明基于开发的分子标记引物组合提供用于辅助筛选优良杨梅种质资源的方法，在杨梅叶片形态性状表型预测上有重要的指导意义，具有操作简单、高效快速和成本低等优点。

技术领域

本发明涉及一组快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合及其应用，属于分子生物学领域。

背景技术

果树叶片是进行光合作用的主要场所，其形态与果实的产量和品质密切相关，并且在抗逆境胁迫应答中发挥十分重要的作用。一般而言，植物叶片形态特征的建成是一个非常复杂的生理生化过程，同一种植物也可能差异悬殊。不同的叶片形状对光能的利用效率不一样。因此，运用生物信息学、现代分子生物学、基因组学等展开对其的研究将进一步加深对植物叶片形态建成分子机制的理解，同时可望为培育高品质、抗逆果树新品种开辟新的途径。

杨梅(Myrica rubra Sieb.and Zucc.)是原产我国南方的特色果树，果实富含花色素苷，具有较高的营养价值，鲜食与加工兼宜。根据杨梅叶片形态主要可分为倒披针形、倒卵圆形、匙形三类。本课题组前期研究发现，杨梅叶片形态与果实发育期长短及品质均密切相关，其中，白杨梅品种的叶片形态多为倒披针形，品质佳；而“匙形”叶片形态杨梅品种多为早熟杨梅品种。此外，改善叶片形态对杨梅光合作用、蒸腾作用及提升杨梅果实品质都有重要意义，通过叶形改造创建杨梅理想株型的育种途径是可行的。因此，通过杨梅叶片形态与生理相结合、分子设计理论与传统育种实践相结合，即叶形的改造与高光效育种相结合，提高光合效率、理顺库.源关系，同时，采用分子生物学技术理论与育种实践相结合的方法，实现杨梅株型整体改良或某一性状的定向改造，将是未来杨梅定向育种的一条行之有效的途径。然而，由于杨梅童期长(实生繁殖定植后8年以上)，实生苗处于幼苗阶段，其叶片形态尚未定型，且尚无其他特征可以明示其发育后期及成年阶段的叶片形态类型，滞后杨梅叶形定向育种进程。而现代生物技术的发展为杨梅叶片形态的早期预测鉴定提供一种有效的方法——DNA分子标记，利用与叶片形态相关的特异DNA分子标记完全有可能在短时间内对杨梅育种材料的叶片形态进行早期鉴定，从而可以大大加速育种的进程。因此，建立一种有效的分子标记组合及其检测方法，并实现高通量分型检测辅助筛选，成为本领域研究人员急需解决的问题之一。本发明中的杨梅叶片形态性状特异位点是经过杨梅当前地方主栽品种及优株群体(大于100份)DNA重测序结果，并展开全基因组关联分析(Genome wideassociation study，GWAS)获得，经过了较大样本杨梅品种群体验证，其鉴定准确性较为可靠。

发明内容

本发明的目的是提供一组可用于快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案为：一组快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合，包括Y9766732-F和Y9766732-R，具体序列为：

Y9766732-F：5’-GGCACGTGTCACGTATTAATTGGTGGTGACCTTC-3’，

Y9766732-R：5’-ATAGATCCCTCTATCCACTCACCGTCAT-3’。

本发明还公开了上述的分子标记引物组合在快速鉴定杨梅叶片形态性状中的应用。

其步骤包括：

(1)引物合成：合成权利要求1所述的引物Y9766732-F和Y9766732-R；

(2)DNA的提取：提取杨梅叶片的基因组DNA；