[发明专利]快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合及其应用有效
| 申请号： | 202110778765.8 | 申请日： | 2021-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN113308565B | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 焦云;房聪玲;柴春燕;高中山;汪国云;贾慧敏;舒巧云;周超超 | 申请（专利权）人： | 宁波市农业科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/686;C12N15/11 |
| 代理公司： | 江苏斐多律师事务所 32332 | 代理人： | 张佳妮 |
| 地址： | 315040 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 鉴定 杨梅 叶片 形态 性状 分子 标记 引物 组合 及其 应用 | ||
1.一组快速鉴定杨梅叶片形态性状的分子标记引物组合，其特征在于包括Y9766732-F和Y9766732-R，具体序列为：
Y9766732-F：5’-GGCACGTGTCACGTATTAATTGGTGGTGACCTTC-3’，
Y9766732-R：5’-ATAGATCCCTCTATCCACTCACCGTCAT-3’。
2.权利要求1所述的分子标记引物组合在快速鉴定杨梅叶片形态性状中的应用。
3.权利要求2所述的应用，其步骤包括：
(1)引物合成：合成权利要求1所述的引物Y9766732-F和Y9766732-R；
(2)DNA的提取：提取杨梅叶片的基因组DNA；
(3)PCR扩增：基于上述杨梅叶片基因组DNA，使用步骤(1)合成的引物Y9766732-F和Y9766732-R进行PCR扩增，预先加入两个已确定叶片形态为“匙形”的杨梅样本DNA作为内参；
(4)扩增产物检测与分析：对PCR产物进行基因型检测分析，若有PCR扩增产物出现且与内参样本聚集为一组者即可视为同一叶片形态，即“匙形”类型；若没有任何PCR扩增产物出现者视为其他叶片形态类型。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤(3)中PCR扩增反应体系为：20ng/μL的样品基因组DNA模板2.0μL，2×SG Fast qPCR Master Mix 5μL，10μM的正向引物0.5μL，10μM的反向引物0.5μL，ddH2O补足至10μL即可；PCR扩增为两步法程序，即95℃3min，然后95℃3s，60℃30s进行25个循环。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤(4)中采用ABI Q6 Flex实时荧光定量PCR系统平台Genotyping功能模块自动分析结果。
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