[发明专利]鉴定杨梅果实颜色性状的SNP分子标记引物及其应用有效
| 申请号： | 202110778764.3 | 申请日： | 2021-07-09 |
| 公开（公告）号： | CN113293227B | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 焦云;房聪玲;柴春燕;高中山;汪国云;贾慧敏;舒巧云;周超超 | 申请（专利权）人： | 宁波市农业科学研究院 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 江苏斐多律师事务所 32332 | 代理人： | 张佳妮 |
| 地址： | 315040 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 杨梅 果实 颜色 性状 snp 分子 标记 引物 及其 应用 | ||
1.一组鉴定杨梅果实颜色性状的SNP分子标记引物，其特征在于所述引物包括C2-2021-51-F和C2-2021-51-R，具体序列为：
C2-2021-51-F：5’-CTTATGTTTCAGGTTTTGTGGCTTA-3’，
C2-2021-51-R：5’-AGTACTGTAAGAGTGGCAAAAATG-3’。
2.权利要求1所述的SNP分子标记引物在鉴定杨梅果实颜色性状中的应用。
3.权利要求2所述的应用，其步骤包括：
(1)引物合成：合成权利要求1所述的引物C2-2021-51-F和C2-2021-51-R；
(2)DNA的提取：提取杨梅叶片的基因组DNA；
(3)PCR扩增：基于上述杨梅叶片基因组DNA，使用步骤(1)合成的引物C2-2021-51-F和C2-2021-51-R进行PCR扩增，预先加入两个已确定果实颜色为白色的样本DNA作为内参；
(4)扩增产物检测与分析：对PCR产物进行基因型检测分析，若有PCR扩增产物出现且与内参样本聚集为一组者即可视为同一果实颜色类型，若没有任何PCR扩增产物出现者视为其他颜色类型，从而确定杨梅果实颜色性状。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤(3)中PCR扩增反应体系为：20ng/μL的样品基因组DNA模板2.0μL，2×SG Fast qPCR Master Mix 5μL，10μM的C2-2021-51-F 0.5μL，10μM的C2-2021-51-R 0.5μL，ddH2O补足至10μL即可；PCR扩增为两步法程序，即95℃3min，然后95℃3s，60℃30s进行20个循环。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：步骤(4)中采用ABI Q6 Flex实时荧光定量PCR系统平台Genotyping功能模块自动分析结果。
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