[发明专利]促根生科萨克氏菌ZJPH202011及其应用

权利要求书

1.促根生科萨克氏菌(Kosakonia radicincitans)ZJPH202011，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2021年6月11日，保藏编号：CCTCC No：M 2021714，地址：中国，武汉，武汉大学，430072。

2.如权利要求1所述的促根生科萨克氏菌ZJPH202011在催化4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮不对称还原制备(R)-1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇中的应用。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述的应用为：以促根生科萨克氏菌ZJPH202011经发酵培养获得的湿菌体为酶源细胞，以4'-溴-2,2,2-三氟苯乙酮为底物，加入辅助底物，以pH 6.0-8.0的磷酸盐缓冲液为反应介质构成转化体系，在25-37℃、150-250rpm条件下进行反应，反应结束后，获得含(R)-1-(4-溴苯基)-2,2,2-三氟乙醇的转化液；所述辅助底物为以下一种或多种：葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、甘油、异丙醇、甲醇、赖氨酸、酪氨酸、谷氨酰胺。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述底物的用量以所述磷酸盐缓冲液的体积计为2-10g/L。

5.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述湿菌体的用量以所述磷酸盐缓冲液的体积计为100-600g/L。

6.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述辅助底物的用量以所述磷酸盐缓冲液的体积计为30-200g/L。

7.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述辅助底物为甘油，甘油的用量以所述磷酸盐缓冲液体积计为600g/L。

8.如权利要求3所述的应用，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液为磷酸钾缓冲液或磷酸钠缓冲液。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液为磷酸钾缓冲液。

10.如权利要求2所述的应用，其特征在于所述湿菌体按如下方法获得：

1)斜面培养：挑取促根生科萨克氏菌ZJPH202011单菌落接种至第一次斜面培养基中，30-37℃培养24h，挑取第一次斜面培养基上生长的菌落再次接种至第二次斜面培养基中，30-37℃培养24h，得到经斜面培养两次后的斜面菌种；所述第一次斜面培养基和第二次斜面培养基中各组分终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH₄)₂SO₄ 2g/L，KH₂PO₄ 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO₄ 0.244g/L，琼脂20g/L，溶剂为水，pH 6.5；

2)种子培养：从步骤1)中所得的经斜面培养两次后的斜面菌种挑取一满环接入种子培养基中，25-37℃、150-250rpm培养10～15h，获得种子液；所述种子培养基中各组分终浓度组成为：葡萄糖15g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，(NH₄)₂SO₄ 2g/L，KH₂PO₄ 2g/L，NaCl 1g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5g/L，溶剂为水，pH 6.5；

3)发酵培养：以体积浓度6％-15％的接种量将种子液接种至发酵培养基中，25-37℃、150-250rpm发酵培养24-32h；发酵培养结束后，将所得发酵液离心，所得沉淀用0.1M，pH7.0的K₂HPO₄-KH₂PO₄缓冲液洗涤，再次离心后获得所述湿菌体；所述发酵培养基中各组分终浓度组成为：蔗糖25g/L，硫酸铵5g/L，K₂HPO₄ 2g/L，溶剂为水，pH 6.5。