[发明专利]一种获得大肠杆菌超级感受态细胞的制备方法

权利要求书

1.一种获得大肠杆菌超级感受态细胞的制备方法，其特征在于，包括步骤为：

步骤1：接种受体菌，在LB固体培养基上划线，获取单克隆；

步骤2：将单克隆至培养基中，摇床上振荡培养；

步骤3：当振荡培养浑浊后，测定溶液的OD₆₀₀值；

步骤4：对溶液冷却、离心，收集第一沉淀；

步骤5：采用缓冲液将所述第一沉淀重悬得到重悬液，并冷却；

步骤6：再对重悬液离心，收集第二沉淀；

步骤7：采用缓冲液将所述第二沉淀重悬；

步骤8：滴加二甲基亚砜，冷却，得到感受态细胞；

步骤9：将所述感受态细胞冷冻保存。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中所述振荡培养的温度为20-25℃，时间为20-48小时。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中所述培养基为包括细菌培养用胰化蛋白胨和酵母混合而成的培养基，所述细菌培养用胰化蛋白胨的浓度为3-5％w/v，所述酵母的浓度为0.4-0.7％w/v。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2中所述培养基的制备过程为将胰化蛋白胨、酵母、氯化钠和氯化钾混合，加压蒸汽灭菌，再加入氯化镁和硫酸镁制得培养基。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3中，当溶液的OD₆₀₀值为0.5-0.7时，将溶液取出冷却。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4中所述离心是在转速为2300-2600g下，溶液离心8-11分钟。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤5中所述缓冲液为包括哌嗪-1,4-二乙磺酸、氯化钙、氯化钾和氯化锰的水溶液，所述缓冲液的pH值为6.4-6.7，所述哌嗪-1,4-二乙磺酸的浓度为7-15mM，所述氯化钙的浓度为25-33mM，所述氯化钾的浓度为210-300mM，所述氯化锰的浓度为50-60mM。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤6中所述离心是在转速为2300-2600g下，重悬液离心7-9分钟。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤8中滴加至所述二甲基亚砜的体积浓度为5-9％。

10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤9中所述冷冻是在液氮中冷冻的，所述保存是在-80℃下长期保存。