[发明专利]滚环扩增诱导酶开关激活的方法在审
| 申请号： | 202110771113.1 | 申请日： | 2021-07-08 |
| 公开（公告）号： | CN115595358A | 公开（公告）日： | 2023-01-13 |
| 发明（设计）人： | 鞠熀先;吴洁;敖航 | 申请（专利权）人： | 南京大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6844 | 分类号： | C12Q1/6844 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210023 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 扩增 诱导 开关 激活 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种滚环扩增诱导酶开关激活的方法，其特征在于以被二价铜离子(Cu2+)抑制了催化活性的辣根过氧化物酶(HRP)为酶开关(HRP-Cu2+)，以核酸滚环扩增中产生的焦磷酸根离子(PPi)为激活剂，基于PPi对Cu2+强的络合作用，HRP-Cu2+中的Cu2+被PPi络合离去，从而恢复HRP的活性，完成酶开关的激活，激活后的酶开关可联合HRP催化反应，产生比色、化学发光等信号，该方法可用于能诱发滚环扩增反应的靶标分子的高灵敏检测。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的HRP-Cu2+是通过在HRP溶液中加入高浓度的Cu2+，并在37℃下反应30分钟后分离纯化获得，相比于HRP，HRP-Cu2+的过氧化物酶活性被抑制了90％以上。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的PPi是聚合酶phi29催化脱氧核糖核苷三磷酸(dNTPs)滚环扩增反应时生成的副产物，能在核酸滚环扩增过程中被大量生成。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的酶开关的激活是通过在HRP-Cu2+溶液中加入滚环扩增的完成溶液并室温下反应5分钟而实现的。
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