[发明专利]一种柘木精制多糖的制备方法

说明书

本发明涉及一种柘木精制多糖的制备方法，包括以下步骤：制备柘木粗多糖；配制高速逆流色谱双水相体系，设置高速逆流色谱仪参数；配制柘木粗多糖的样品溶液，经高速逆流色谱一步纯化柘木粗多糖；合并获得的柘木精制多糖溶液流分、透析、冷冻干燥，得到纯化后的柘木精制多糖。与现有技术相比，本发明操作简单，原料廉价易得，工艺绿色环保；所获得的柘木精制多糖纯度为60％左右，可用于柘木多糖的结构鉴定与分析。

技术领域

本发明涉及天然产物有效成分的提取、纯化领域，尤其是涉及一种柘木精制多糖的制备方法。

背景技术

柘树是桑科柘属植物。柘树中含有许多化学成分，如酮类化合物、生物碱类、多糖类和呫吨酮类等。它在传统中医中被用作“川婆石”，用于治疗淋病、风湿病、黄疸、疖子和疥疮等疾病。柘树的根具有化瘀止血、清肝明目的功效；柘树根皮已被广泛用于治疗腰痛、咯血和挫伤；柘树的茎也以糖浆、颗粒和注射剂的形式用于治疗消化道肿瘤。柘树在过去几十年中已经成为最普遍的抗癌民间药物之一。

学者们在对柘木多糖提取过程中，一般会采用Sevag法去除蛋白质，并且采用阴离子交换树脂和葡聚糖凝胶树脂对粗多糖进行分离纯化。CN200410024199公开了提取柘木多糖的方法，涉及天然植物提取、纯化、分离技术。该方法包括以下技术方案：柘树根粉碎，浸泡提取、离心、过滤、合并滤液，滤液过pH＝4的大孔吸附树脂，减压浓缩，醇析，Sevag法去蛋白，透析及分离纯化。浸泡6-8小时，在70℃下提取，吸附树脂为pH＝4的3520树脂，去蛋白采用Sevag法，透析后经DEAE-SeohadexA-50凝胶柱，用水及NaCl溶液洗脱，洗脱液透析、冷冻干燥得纯品。该技术方案中，Sevag试剂重复操作去除蛋白质时，会造成多糖的损失，降低多糖的提取率；并且氯仿为易制毒溶液，不够绿色环保。葡聚糖凝胶树脂分离多糖，不仅操作复杂，还存在效率低，成本高等缺点。

CN101974094A公开了一种综合提取柘木多糖和黄酮的方法，涉及天然植物提取技术。该方法包括以下技术方案：取柘木药材于55℃烘箱烘干粉碎，过40-80目筛，加入不同浓度乙醇溶液梯度回流提取，提取液浓缩，依次用石油醚和水饱和正丁醇萃取，萃余液加入95％乙醇至沉淀完全，离心分离，得离心沉淀物和上清液；将沉淀物用丙酮反复洗涤，冷冻干燥，即得柘木多糖。该技术方案为柘木多糖的粗提取，没有进一步去除柘木多糖中的蛋白质、核苷酸等物质。并且，丙酮为有毒试剂，不够绿色环保。

发明内容

本发明的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种柘木精制多糖的制备方法，克服了现有的纯化方法在柘木多糖分离纯化过程中存在的操作复杂、提取率低、纯度低、多糖结构被破坏等不足。

本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：

本申请的目的是保护一种柘木精制多糖的制备方法，包括以下步骤：

S1：制备柘木粗多糖；

S2：配制高速逆流色谱双水相体系，设置高速逆流色谱仪参数；

S3：配制柘木粗多糖的样品溶液，经高速逆流色谱一步纯化柘木粗多糖；

S4：合并获得的柘木精制多糖溶液流分、透析、冷冻干燥，得到纯化后的柘木精制多糖。

进一步地，S1包括以下过程：

A.原材料的处理：将柘木碎屑放入载物托盘中，铺平，烘干；

B.破壁、过筛处理：将步骤A所烘干的柘木碎屑放入粉碎机中粉碎，过筛，筛出柘木粉末，密封保存；

C.柘木粗多糖的提取：将一定质量的B步骤处理的柘木粉末置入三口烧瓶中，加入一定体积的水作为提取剂，一定温度下加热回流一段时间，重复提取多次，抽滤，弃去滤渣，合并提取液，旋转蒸发得到浓缩提取液；

D.醇沉多糖：向C步骤得到的浓缩液中加入一定量的乙醇，低温静置一段时间，得到多糖沉淀；