[发明专利]一种柘木精制多糖的制备方法

权利要求书

1.一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：制备柘木粗多糖；

S2：配制高速逆流色谱双水相体系，设置高速逆流色谱仪参数；

S3：配制柘木粗多糖的样品溶液，经高速逆流色谱一步纯化柘木粗多糖；

S4：合并获得的柘木精制多糖溶液流分、透析、冷冻干燥，得到纯化后的柘木精制多糖。

2.根据权利要求1所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，S1包括以下过程：

A.原材料的处理：将柘木碎屑放入载物托盘中，铺平，烘干；

B.破壁、过筛处理：将步骤A所烘干的柘木碎屑放入粉碎机中粉碎，过筛，筛出柘木粉末，密封保存；

C.柘木粗多糖的提取：将一定质量的B步骤处理的柘木粉末置入三口烧瓶中，加入一定体积的水作为提取剂，一定温度下加热回流一段时间，重复提取多次，抽滤，弃去滤渣，合并提取液，旋转蒸发得到浓缩提取液；

D.醇沉多糖：向C步骤得到的浓缩液中加入一定量的乙醇，低温静置一段时间，得到多糖沉淀；

E.多糖干燥：将D步骤得到的溶液离心，弃去上清液，烘干沉淀物，得到柘木粗多糖。

3.根据权利要求1所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，S2包括以下过程：

F.高速逆流色谱双水相体系两相溶液的配制：将乙醇、无机盐和水按照一定质量比例混合、静置分层，其中上层作为固定相，下层作为流动相，分离两相，将固定相和流动相都进行超声脱气处理。

4.根据权利要求1所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，S3包括以下过程：

G.进样样品的配制：取一定质量的E步骤所得的柘木粗多糖，将其溶解到一定体积的F步骤所得下相中，离心弃去不溶物，得到进样样品；

H.高速逆流色谱分离样品：先将固定相泵入色谱柱中，色谱柱中充满固定相之后，转动主机，再将流动相泵入色谱柱中，待两相溶液在色谱柱中达到平衡状态时，将G步骤制得的样品从进样口注入色谱柱中，同时开启自动收集器收集流分。

5.根据权利要求1所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，S4包括以下过程：

I.流分的检测：使用苯酚-硫酸法检测H步骤中收集的流分；

J.流分的合并：将步骤I中相同的流分合并；

K.流分的处理：透析步骤J中合并的流分，之后进行冷冻干燥，得到精制柘木多糖。

6.根据权利要求2所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，过程B中使用100目筛子，以此筛选出大于100目的柘木粉末；

C过程中加热回流按照液料比为10-40mL/g加入提取剂，温度为70-100℃，时间为1-5h，重复2次得到浓缩提取液。

7.根据权利要求2所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，过程D中加入浓缩液3倍体积的乙醇，采用乙醇的浓度为95％，低温静置过程为在4℃下静置12h，得到多糖沉淀；

过程E中在60℃下烘干沉淀物，得到柘木粗多糖。

8.根据权利要求3所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，过程F中的双水相体系中，无水乙醇、硫酸铵和水按照30％：(16-20)％：(50-54)％的质量比配制，两相超声脱气时间均为20min。

9.根据权利要求4所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，过程G中柘木粗多糖在流动相中的溶解比例为100mg柘木粗多糖/10mL流动相；

过程H中以20mL/min的流速将固定相泵入色谱柱中，以2mL/min的流速将流动相泵入色谱柱中，主机正转转速为800r/min，分离温度为30℃，自动收集器5min收集一管流分。

10.根据权利要求5所述的一种柘木精制多糖的制备方法，其特征在于，过程K中使用截留分子量为7000Da的透析袋对步骤J中合并的流分透析3天。