[发明专利]新冠病毒重组蛋白和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白及其制备方法和应用

说明书

本发明涉及新冠病毒重组蛋白和人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白及其制备方法和应用；新冠病毒S1‑NCTD重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白具有的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示；本发明还提供所述新冠病毒S1‑NCTD重组蛋白和人血管紧张素转换酶‑2重组蛋白在制备新冠病毒中和抗体的ELISA检测试剂盒上的应用。与现有技术相比，本发明利用基因工程技术在原核系统大肠杆菌中制备了该两种重组蛋白，均可以成功高效表达，且具有良好的抗原性，能很好地用以检测新冠病毒中和抗体，并在新冠疫苗接种后的免疫力评估中得到应用。相比较于其他传统方法更为安全高效，对于新冠病毒的基础研究以及临床检测具有积极意义。

技术领域

本发明属于分子生物学和医学的基因工程技术领域，具体涉及新冠病毒重组蛋白(S1-NCTD)和人血管紧张素转换酶-2(ACE2)重组蛋白及其制备方法和应用。

背景技术

新冠病毒全球大流行，给人类产生了灾难性的影响，根据世界卫生组织(WHO)的报告，截止到2021年7月1日全球发病人数达1.8亿人，死亡人数超过394.5万人。

病原体被鉴定为2019-nCoV，随后被命名为SARS-CoV-2，属于SARS相关冠状病毒，与17年前SARS爆发的病原体相同。虽然分子检测技术，如聚合酶链反应(PCR)和下一代测序，在病毒基因变化的急性诊断和监测中发挥了重要作用，但迫切需要一种可靠和通用的血清或抗体检测方法。这种抗体检测方法用于回顾性接触追踪，调查无症状感染率，准确确定病死率，评估恢复患者和候选疫苗接受者的群体免疫和体液保护性免疫，寻找天然储层和中间宿主。全世界的研究实验室和制药公司正在竞相生产具有足够特异性和敏感性抗体测试，以检测COVID-19感染并评估疫苗的保护作用。

有两种抗体测试可以瞄准。第一种是传统的病毒中和试验，检测患者血液中的中和抗体，因为新冠病毒具有高传染性和高致病性，这种方法需要在专门的生物安全3级(BSL3)实验室进行，在遏制设施中处理活的新冠病毒，需要2-4天才能完成，因此这种检测方法操作复杂，费时费力，难以普及。另一种，是基于假病毒进行中和抗体的检测，可以在BSL2实验室中进行，但仍然需要使用活病毒和细胞培养。目前所有其他检测方法，如酶联免疫吸附试验(ELISA)和侧流分析(LFA)快速试验，代表第二种检测类型，检测总结合抗体，一般无法分出来总结合抗体和中和抗体。

新冠病毒感染人类机体是通过病毒表面S蛋白的“受体结合结构域”(Receptor-binding domain,简称RBD)与机体细胞表面一种叫做血管紧张素转换酶2(Angiotensinconverting enzyme 2，简称ACE2)的受体蛋白结合后进入细胞，病毒在细胞内大量复制增殖引起一系列的病理改变，最后导致新冠肺炎。新冠病毒的中和抗体可以特异性地与病毒RBD结合，从而能够阻断RBD与细胞ACE2的结合，使病毒不能进入细胞，病毒就失去感染性，机体就得到保护。因此建立一种简单易行、基于这种RBD-ACE2相互作用特定中和抗体的中和行(即阻断)、不用活病毒、在普通非高级别生物安全实验室就可以开展的中和抗体检测替代方法，其必要性和迫切性凸显。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种方便、多效、低成本、并具有良好抗原性的新冠病毒(S1-NCTD)重组蛋白(GST-S1-NCTD)和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白(GST-ACE2)及其制备方法和应用

本发明的第一个目的是分别提供抗原性的新冠病毒(S1-NCTD)重组蛋白(GST-S1-NCTD)和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白(GST-ACE2)。

本发明的第二个目的是一种重组质粒。

本发明的第三个目的是提供一种基因工程菌株。

本发明的第四个目的是分别提供抗原性的新冠病毒(S1-NCTD)重组蛋白(GST-S1-NCTD)和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白(GST-ACE2)的制备方法。