[发明专利]新冠病毒重组蛋白和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 202110762069.8 | 申请日： | 2021-07-06 |
| 公开（公告）号： | CN113563477B | 公开（公告）日： | 2023-08-04 |
| 发明（设计）人： | 郭玉芊;杨智昉;艾丁 | 申请（专利权）人： | 上海健康医学院 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/48;C12N15/70;C12N1/21;G01N33/569 |
| 代理公司： | 上海科盛知识产权代理有限公司 31225 | 代理人： | 褚明伟 |
| 地址： | 201318 上*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 病毒 重组 蛋白 血管 紧张 转换 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种新冠病毒S1-NCTD重组蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种如权利要求1所述新冠病毒S1-NCTD重组蛋白的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)从新冠病毒S基因YP_009724390.1选取编码S1-NCTD片段aa25-588的核苷酸序列，相对应的核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示，并以此为模板，设计上游引物和下游引物，然后经过PCR扩增获得S1-NCTD的目的基因；
2)经BamHI和NotI双酶切后，插入到表达质粒pGEX-4T2，构建重组质粒pGEX-4T2-S1-NCTD；将重组质粒转化至大肠杆菌Chaperone pG-KJE8/BL21(DE3)菌株获得重组工程菌；将重组工程菌利用IPTG诱导表达重组蛋白并通过包涵体处理获得目的蛋白，表达产物用SDS-PAGE鉴定，最终获得GST-S1-NCTD重组蛋白。
3.权利要求1所述新冠病毒S1-NCTD重组蛋白的应用，其特征在于，所述新冠病毒S1-NCTD重组蛋白和人血管紧张素转换酶-2重组蛋白在制备新冠病毒中和抗体的ELISA检测试剂盒上的应用，所述人血管紧张素转换酶-2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
4.一种新冠病毒中和抗体ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括包被抗原和酶标二抗，其中，以新冠病毒S1-NCTD重组蛋白作为新冠病毒包被抗原，以人血管紧张素转换酶-2重组蛋白标记后作为酶标二抗，所述新冠病毒S1-NCTD重组蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述人血管紧张素转换酶-2重组蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
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