[发明专利]伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法及应用

说明书

本发明提供了伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法及应用。伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法包括：配制10mg/ml的刀豆球蛋白A PBS溶液，分装为20μl/滴，使用时用胰岛素注射针吸取一滴，注射到小鼠一侧泪腺即可。使用小鼠品系为普通BALB/c小鼠，价格较低，且成模率为70％以上。本方法为单次注射方法，药物使用率低，造模周期短；此方法诱导的干眼症模型，符合该症的部分临床特征；干眼症小鼠模型可以应用于治疗干眼症药物的研发。

技术领域

本发明属于动物实验模型构建技术领域，涉及伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法及应用。

背景技术

干眼症，即角膜干燥症，是一种由于某种原因引起泪液量或质异常及动力学异常，从而使泪膜不稳定，并伴有眼表炎症，导致眼部不适甚至视力受损的疾病。目前使用的干眼症动物模型可以分为五类，包括泪液不足型干眼症、蒸发过强型干眼症、黏蛋白缺乏型干眼症、泪液动力学异常型干眼症以及混合型干眼症。包括使用原发性的动物模型和药物诱导模型以及手术模型。

原发性的动物模型虽然往往最贴合临床特征，但是这一类往往模型制备复杂，或者成模率低；手术模型一般采取泪腺摘除的方法，但是动物泪腺代偿的存在使的成模率往往不高，且模型稳定性不够；药物诱导模型一般作为实验室优先考虑的造模方法，包括使用东莨菪碱对泪腺造成损伤、使用雄激素受体拮抗剂等或者以扰乱睑板腺对动物泪膜的脂质层造成损伤、或利用维生素A缺乏对动物杯状细胞和黏蛋白表达造成影响，或利用光刺激使动物泪液动力学异常。

目前虽然使用的动物模型十分广泛，但尚未有一种理想的模型作为研究工具。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法及应用。

为了实现上述技术目的，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了伴刀豆球蛋白A诱导的小鼠干眼症模型的构建方法，包括：配制10mg/ml至15mg/ml的刀豆球蛋白A PBS溶液，分装为20±2μl/滴，使用时用胰岛素注射针吸取一滴，注射到小鼠一侧泪腺即可。

优选地，所述小鼠为成年BALB/c小鼠。

优选地，上述方法还包括造模后第三天进行模型验证。

优选地，所述模型验证的方法包括：在全身麻醉和无局部麻醉状态下利用酚红棉线对小鼠泪液分泌量进行检测，酚红棉线染色长度达5mm认为小鼠泪液分泌正常，染色长度为2mm则认为小鼠泪液分泌不足，造模成功。

优选地，所述模型验证的方法包括：采用3％Lissamine Green B染色剂对小鼠进行滴眼，持续1min，纱布吸去多余染液，此后在显微镜下观察小鼠角膜染色情况，正常小鼠眼球不着色，成模小鼠角膜染为蓝色。

优选地，所述模型验证的方法包括：使用RT-PCR对小鼠泪腺RNA进行检测，泪腺萎缩后RNA含量将降低，体现在RT-PCR目的扩增片段CT值增加。

本发明还提供了上述构建方法的应用，所述应用包括在用于治疗干眼症的药物研发中的应用。

优选地，所述应用包括：构建干眼症动物模型后，根据分组对动物执行治疗方案，待治疗方案周期结束后，通过包括病理、生化检测在内的相关检测来确认治疗药物是否有效。

更优选地，所述分组包括模型组、正常对照组、阳性药物组和阴性药物组。

本方法在分类上为药物诱导致泪液分泌不足类型，但相对于传统方法，有如下优点：

一)使用小鼠品系为普通BALB/c小鼠，价格较低，且成模率为70％以上。

二)本方法为单次注射方法，相对传统的多次长时间诱导，具有药物使用率低，造模周期短的优点。