[发明专利]一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法

说明书

本发明涉及抗体检测方法技术领域，具体公开了一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法。本方法包括以下步骤：S1、用二巯苏糖醇和缓冲液处理诱导痰，震荡冰浴，获得痰悬浮液，过滤离心，取上清液，获得痰上清；S2、将痰上清与混有Protein A/G琼脂糖纯化树脂的结合缓冲液混合，获得混合液I，孵育1‑2h；S3、将混合液I离心，去上清得免疫复合物，洗涤，洗脱，离心免疫复合物，取上清得混合液II，在混合液II中加入中和缓冲液混合得混合液III，最后测定混合液III中的抗中性粒细胞胞浆抗体。本发明检测方法提高了ANCAs相关性疾病的ANCAs检测率，其检测效果优于常规的血清检测，其方法还具有敏感性和特异性强等优点。

技术领域

本发明涉及抗体检测方法技术领域，尤其是涉及一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法。

背景技术

抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCAs)是一类针对中性粒细胞颗粒和单核细胞溶酶体的自身抗体。目前ANCAs的检测技术主要是利用血清稀释后直接上样，通过间接免疫荧光法或酶联免疫吸附实验进行检测。

目前有研究认为ANCAs相关性血管炎的发病可能与ANCAs密切相关。第一种是韦格纳氏肉芽肿(WG)，WG是一种累及小动、静脉及毛细血管的弥漫性坏死性肉芽肿性炎症，主要侵犯上、下呼吸道和肾脏WG中。WG血清中ANCA的检出敏感性与疾病累及范围相关，当WG累及到肾、肺等脏器时表现为全身性WG，其敏感性可高达90％以上；而当WG仅累及到耳鼻喉等器官时表现为局限性WG，其敏感性则仅有50％。第二种是显微镜下多血管炎(MPA)，MPA是一种主要表现为不含肉芽肿性的寡免疫性小血管炎，它主要影响的血管为中、小动脉，偶尔也会影响微动脉及微静脉。该病主要累及肾脏，其中90％以上患者会出现新月形的肾脏损伤，较少出现肺、眼、鼻、喉等器官的损伤。有研究结果显示MPA患者血清ANCA阳性率为43.3％，全部为p-ANCA型。第三种是嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)，EGPA它是一种主要累及中、小动脉的系统性血管炎，较WG与MPA少见，该病常出现多器官受累，包括肺、心脏、肝脏、皮肤、肾脏等，其肾脏及肺部的损伤程度较WG、MPA轻，而更易发生致死性心力衰竭。既往研究报道中，EGPA患者血清ANCAs的检出率均在30％～40％。

综上所述，ANCAs虽然与ANCAs相关性血管炎疾病的发生发展相关，但现存的血清ANCA检测技术对ANCAs的检出率普遍偏低，尤其对于EGPA。许多的EGPA病人在疾病的早期临床表现并不特异，主要是喘息、咳嗽、胸闷等哮喘样症状，极易被误诊为难治性哮喘。60％以上的EGPA病人以哮喘样症状为首发症状，且缺少呼吸系统以外的临床表现和全身的病理反应，可能是其外周血ANCA检出率低的主要原因之一。EGPA总人群每年新发病率为0.5-6.8例/百万，而哮喘人群中每年新发病率达64.4例/百万人。典型的病理表现为诊断的“金标准”，但操作起来比较麻烦，且活检不一定能取得阳性部位。大部分EGPA患者在多器官损害后才得以确诊，严重影响预后。既往的研究表明，对于EGPA及哮喘等主要累及呼吸系统的疾病，其气道中局部的免疫炎症反应比全身更加严重，气道中的自身抗体、细胞因子等水平明显高于外周循环系统；尤其对于早期EGPA病人，在累及全身表现之前，气道局部免疫炎症反应会出现更早且更加严重。因此检测痰上清中的ANCA可能更有助于EGPA的早期诊断。

发明内容

本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法，提高了ANCAs相关性疾病的ANCAs检测率，为疾病的早诊断、早治疗提供可靠的依据。

本发明提供了一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法，包括以下步骤：

S1、用二巯苏糖醇和缓冲液处理诱导痰，震荡冰浴，获得痰悬浮液，将痰悬浮液过滤离心，取上清液，获得痰上清；

S2、将步骤S1得到的痰上清与混有Protein A/G琼脂糖纯化树脂的结合缓冲液混合，获得混合液I，将混合液I孵育1-2h；