[发明专利]一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法

权利要求书

1.一种痰上清抗中性粒细胞胞浆抗体的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、用二巯苏糖醇和缓冲液处理诱导痰，震荡冰浴，获得痰悬浮液，将痰悬浮液过滤离心，取上清液，获得痰上清；

S2、将步骤S1得到的痰上清与混有Protein A/G琼脂糖纯化树脂的结合缓冲液混合，获得混合液I，将混合液I孵育1-2h；

S3、将孵育后的混合液I离心，去上清得免疫复合物，先用高盐缓冲液洗涤免疫复合物，然后用洗脱液洗脱免疫复合物，再将洗脱后的免疫复合物离心，取上清得混合液II，在混合液II中加入中和缓冲液混合得混合液III，最后使用检测间接免疫荧光法和酶联免疫吸附实验测定混合液III中的抗中性粒细胞胞浆抗体。

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，诱导痰、二巯苏糖醇和缓冲液的体积比为(1-1.5):(3-5):(3-5)。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，离心速度为2000-3000rpm/min，离心时间为10-15min。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中，痰上清、Protein A/G琼脂糖纯化树脂和结合缓冲液的体积为(20-25):(2-4):(70-90)。

5.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S2中，将混合液I置于4℃条件下孵育1-2h。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，高盐缓冲液包括500mMKCl、0.1％Triton-X100和20mM Tris，高盐缓冲液的pH为7.4，洗脱液包括0.1M Glycine和0.1M HCl，洗脱液的pH为2.6，中和缓冲液包括为1M Tris-HCl缓冲液，中和缓冲液的pH为7.4。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述二巯苏糖醇的浓度为0.2％。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述诱导痰来源于哮喘患者或嗜酸性肉芽肿性多血管炎患者。

9.如权利要求1-8任一项所述的检测方法在检测抗中性粒细胞胞浆抗体的水平中的应用。