[发明专利]一种评估天然蜂花粉及发酵蜂花粉致敏性的方法

说明书

本发明涉及食品技术领域，具体涉及一种基于油质蛋白和谷氧还蛋白特征肽指标评价天然蜂花粉及发酵蜂花粉致敏性的方法。本发明首次提出以油质蛋白（Oleosin B2）和谷氧还蛋白（Glutaredoxin）作为未经处理的天然蜂花粉或经发酵处理的蜂花粉致敏性评价的评价指标，并据此提供具体评价过程。同时，在特定蛋白评价方法基础上，本发明还进一步提出通过检测蜂花粉的甲醇提取物中寡肽和氨基酸的含量作为补充手段，进一步验证蜂花粉致敏性的评价结果。本发明所述的评价方法具有准确性高、方便快捷的优点，为蜂花粉的标准化生产和品质控制提供评估依据。

技术领域

本发明涉及食品技术领域，具体涉及一种基于油质蛋白和谷氧还蛋白特征肽指标评估天然蜂花粉及发酵蜂花粉致敏性的方法。

背景技术

蜂花粉因其丰富的营养价值、极高的食用和药用功效，目前已在食品、保健品、药品行业，以及畜牧养殖方面有所应用。然而，随着蜂花粉适用范围的扩大，食用蜂花粉随即带来的安全问题也逐渐引起人们的关注。

蜂花粉来源于植物花粉，虽然经过工蜂的处理，一部分致敏物质发生改变或降解，致敏性较其植物源花粉有所改善；但数据显示，仍有一部分易感人群食用蜂花粉后会产生临床过敏症状。

发酵法已被公认为是一种改善蜂花粉致敏性的主要加工方法，目前发酵蜂花粉已逐渐获得开发和应用。然而，由于现有技术缺少评估蜂花粉致敏性的科学方法，常规食品的致敏性评价方法无法准确评估蜂花粉的致敏程度，因此制约了蜂花粉发酵产品的标准化生产和品质控制。

发明内容

本发明通过对现有蜂花粉致敏性的研究发现，蜂花粉中存在多种致敏蛋白，如Profilin、Expansin、Prolamin以及油质蛋白（Oleosin B2）和谷氧还蛋白（Glutaredoxin）。

进一步地，通过对上述致敏蛋白的研究，本发明发现其中2种致敏蛋白，即油质蛋白（Oleosin B2）和谷氧还蛋白（Glutaredoxin），可作为天然蜂花粉或发酵蜂花粉致敏性的评价指标。

基于此，本发明的第一方面提供致敏蛋白油质蛋白（Oleosin B2）和谷氧还蛋白（Glutaredoxin）的新应用，即其在蜂花粉致敏性的评价中作为评价指标的应用。

进一步优选地，所述蜂花粉为未经处理的天然油菜蜂花粉或经发酵处理的发酵油菜蜂花粉。

更进一步地，所述发酵油菜蜂花粉是指经酵母菌和/或乳酸菌发酵制得的油菜蜂花粉。

本发明的第二方面提供上述蜂花粉致敏性的评价方法。通过该方法可以快速、准确的评价此类蜂花粉是否具有致敏性，为此类蜂花粉的标准化生产和品质控制提供评估依据。

本发明提供的上述蜂花粉致敏性的评价方法，包括：以油质蛋白（Oleosin B2）和谷氧还蛋白（Glutaredoxin）为评价指标，利用蛋白组学技术检测蜂花粉蛋白提取物中油质蛋白和谷氧还蛋白的特征肽段，根据质谱检测及分析结果评价样品的致敏性；

所述蜂花粉为未经处理的天然蜂花粉或经发酵处理的发酵蜂花粉。

进一步地，本发明所述的评价方法中，在所述蛋白组学技术检测实施前，对蜂花粉蛋白提取物进行酶切处理；

所述酶切处理使用的酶为质谱级胰蛋白酶；所述蛋白提取物中蛋白质量与胰蛋白酶的质量比为（30-100）：1；优选50:1。研究表明，通过控制胰酶用量，起到充分酶切蜂花粉蛋白提取物的作用，同时又避免过度酶切而影响鉴定结果的准确性。

所述酶切处理的条件为：37℃下孵育12-14 h。

所述蛋白组学检测条件为：

所述检测采用纳升级液相色谱仪串联组合型质谱仪进行；