[发明专利]一种用于同时检测虾急性肝胰腺坏死症和肝肠孢子虫的多重RPA引物和探针组合物及检测方法有效
| 申请号： | 202110732960.7 | 申请日： | 2021-06-29 |
| 公开（公告）号： | CN113234814B | 公开（公告）日： | 2023-08-22 |
| 发明（设计）人： | 高嵩;马超;廖磊;王佩;张雪;王昱 | 申请（专利权）人： | 江苏海洋大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6883 | 分类号： | C12Q1/6883;C12Q1/6893;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 南京专信知识产权代理有限公司 32605 | 代理人： | 郝晓燕 |
| 地址： | 222005 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 同时 检测 急性 胰腺 死症 肝肠 孢子 多重 rpa 引物 探针 组合 方法 | ||
1.一种同时检测虾急性肝胰腺坏死症和肝肠孢子虫的试剂盒，所述试剂盒含有用于同时检测虾急性肝胰腺坏死症和肝肠孢子虫的多重RPA引物和探针组合物，所述多重RPA引物和探针组合物包括用于检测虾急性肝胰腺坏死症的RPA引物和探针、用于检测肝肠孢子虫的RPA引物和探针，其中：
所述用于检测虾急性肝胰腺坏死症的RPA正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQID NO.1、SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3，用于检测虾急性肝胰腺坏死症的探针序列的5’端用FITC标记，3'端用C3-space进行封闭，距离5'端的30碱基距离处用四氢呋喃取代原有碱基；
所述用于检测肝肠孢子虫的RPA正向引物、反向引物和探针序列分别如SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.6，用于检测肝肠孢子虫的探针序列的5'端进行DIG标记，3'端用C3-space进行封闭，距离5'端30碱基距离处用四氢呋喃取代原有碱基；
用于检测虾急性肝胰腺坏死症和肝肠孢子虫的反向引物进行Biotin的标记。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述多重RPA引物和探针组合物中检测虾急性肝胰腺坏死症的RPA正向引物、反向引物和探针的摩尔比为1:1:0.3，所述用于检测肝肠孢子虫的RPA正向引物、反向引物和探针的摩尔比为1:1:0.3。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述多重RPA引物和探针组合物中检测虾急性肝胰腺坏死症的RPA正向引物、反向引物和用于检测肝肠孢子虫的RPA正向引物、反向引物的摩尔比为3:1，所述检测虾急性肝胰腺坏死症的RPA探针与检测肝肠孢子虫的RPA探针的摩尔比为3:1。
4. 根据权利要求1-3任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括dNTP 、ATP、聚集剂PEG 20000、聚合酶Bsu、重组酶UvsX、辅酶UvsY、单链结合蛋白SSB。
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