[发明专利]一种乳制品前处理方法及乳制品中唾液酸的检测方法

说明书

本发明公开一种乳制品前处理方法及乳制品中唾液酸的检测方法，涉及质控检测领域。本发明提供了一种新的乳制品前处理方法，结合现有的检测方法，可以分别对乳制品中不同形态的唾液酸进行检测，为研究乳制品中唾液酸的存在形式提供可靠的方法。

技术领域

本发明涉及质控检测领域，尤其是一种乳制品前处理方法及乳制品中唾液酸的检测方法。

背景技术

现有检测对蛋白类唾液酸含量的方法包括步骤：(1)对含蛋白类类唾液酸样品进行酸水解，得到酸水解产物；(2)对酸水解产物用标记试剂[4,5-亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐(DMB)]进行标记，获得经标记的混合物；(3)用有机溶剂对所述经标记的混合物进行色谱预处理，获得预处理的混合物；(4)将所述预处理的混合物上样于亲水相互作用色谱柱，进行色谱分离，获得含标记的唾液酸的洗脱液；(5)对所述的洗脱液进行检测，从而获得所述蛋白的唾液酸含量的测定结果。

目前针对奶粉中唾液酸的检测方法，是直接将奶粉水溶后采用DMB(4,5亚甲二氧基-1,2-苯二胺二盐酸盐)荧光标记，未对奶粉水溶液样品进行其它处理，因此检测的为奶粉中唾液酸总量，无法得到奶粉中不同形态唾液酸的含量。

发明内容

基于此，本发明的目的在于克服上述现有技术的不足之处而提供一种乳制品前处理方法及乳制品中唾液酸的检测方法。

为实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：一种乳制品前处理方法，包括以下步骤：

(1)制备含有唾液酸的乳制品样品溶液；

(2)取步骤(1)中制备得到的样品溶液进行超滤离心，取下层清液加入DMB试剂，荧光衍生后得到样品溶液A；

(3)取步骤(1)中制备得到的样品溶液加入三氯乙酸，冰水浴后出现蛋白沉淀，将出现蛋白沉淀的样品溶液进行超滤离心，得到蛋白沉淀；向蛋白沉淀中加入酸水解试剂，加热水解后迅速冷却，得到水解液A；取水解液A加入DMB试剂，荧光衍生后得到样品溶液B；

(4)取步骤(3)中离心后的上清液，加入酸水解试剂，加热水解后迅速冷却，得到水解液B；取水解液B加入DMB试剂，荧光衍生后得到样品溶液C；

(5)取步骤(1)中制备得到的样品溶液，加入DMB试剂荧光衍生后，超滤离心得到样品溶液D。

本发明提供了一种新的乳制品前处理方法，结合现有的检测方法，可以分别对乳制品中不同形态的唾液酸进行检测，为研究乳制品中唾液酸的存在形式提供可靠的方法。本发明样品溶液A结合现有的检测方法，可以检测游离态唾液酸的含量；本发明样品溶液B结合现有的检测方法，可以检测蛋白结合形态唾液酸的含量；本发明样品溶液C结合现有的检测方法，可以检测游离态唾液酸和低聚糖结合态唾液酸的总含量，减去游离态唾液酸即可得到低聚糖结合态唾液酸；本发明样品溶液D结合现有的检测方法，可以检测总唾液酸的含量；本发明采取的方法可以检测总唾液酸、游离态唾液酸、低聚糖结合态唾液酸、蛋白结合形态唾液酸的含量，将总唾液酸含量减去游离态唾液酸含量、蛋白结合态唾液酸含量、低聚糖结合态唾液酸含量后即为脂质结合态唾液酸含量。

优选地，所述步骤(1)中乳制品样品溶液的制备方法为：将不添加唾液酸的乳制品，加入唾液酸，喷干制成乳制品粉末；唾液酸的质量百分含量为乳制品粉末的0.1-0.5％；乳制品粉末加水溶解，得到样品溶液。乳制品包含发酵酸奶、炼乳、乳清粉、牛奶粉、驼奶粉、羊奶粉、杀菌牛乳中的至少一种。

优选地，所述步骤(2)中，超滤离心所用的超滤离心管的膜孔径为2000-4000DA，超滤离心的温度为3-5℃，超滤离心的离心力为3000-5000g，超滤离心的时间为10-20min；下层清液和DMB试剂的体积比为：下层清液：DMB试剂＝1：1-3。