[发明专利]一种用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒及其应用

说明书

本发明提供了一种用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，该试剂盒包含：miRcute miRNA提取分离试剂盒、TruSeq miRNA Sample Prep Kitv2试剂盒和TruSeq SR Cluster Kitv3‑cBot–HS试剂盒。本发明提供的用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，在数十例人肺腺癌组织和正常对照组织中进行验证，确定miR‑215‑5p，miR‑1283，miR‑129‑1‑3p，miR‑126‑3p，miR‑199b‑5p较目前其他预测顺铂敏感性的参数有着更高的稳定性和应用价值。

技术领域

本发明涉及分子诊断技术领域，具体的说，涉及一种用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒及其应用。

背景技术

微小核糖核酸(microRNA，miRNA)是一类内源性的具有调控功能的非编码RNA，长约20～25个核苷酸。miRNA参与各种各样的调节途径，在肿瘤生成、增殖、代谢、凋亡中都发挥着极为重要的作用，在肿瘤诊断和监测等方面也有着广阔的发展前景。

顺铂主要通过靶向DNA复制而抑制肿瘤细胞增殖并引发程序性凋亡。但是，患者接受治疗过程中容易产生顺铂耐药，影响治疗效果。顺铂的耐药机制较为复杂，该药进入肿瘤细胞后，在靶向染色体之前可能会失去活性，失活后的药物将无法与DNA络合以杀伤细胞。因此，预测患者顺铂治疗的敏感性对于肿瘤患者治疗方案的制定极为重要。

技术内容

本发明的目的在于提供一种用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，该试剂盒包含：miRcute miRNA提取分离试剂盒(天根公司)、TruSeq miRNA Sample Prep Kitv2试剂盒(美国Illumina公司)和TruSeq SR Cluster Kitv3-cBot–HS试剂盒(美国Illumina公司)；

本发明所提供的用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，还包含说明书；

本发明所提供的用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，还包含乙醇、水等常用试剂。

本发明提供的用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的试剂盒，用于预测肿瘤患者顺铂敏感性的步骤如下：

(1)使用miRcute miRNA提取分离试剂盒(miRcute miRNA Isolation Kit)提取肿瘤组织样本中的miRNA；

(2)miRNA文库构建：采用TruSeq miRNA Sample Prep Kitv2试剂盒完成；

(3)簇生成：采用TruSeq SR Cluster Kitv3-cBot–HS试剂盒完成；

(4)Illumina Hiseq2000测序：Hiseq2000上机，测序结果将原始数据转换成Fastq格式；

(5)数据分析：

①对原始Fastq文件数据去除接头序列后，并检验测序片段碱基的质量和长度，筛选质量可靠的测序片段；

②将测序结果与miRbase数据库比对过滤，鉴定出结果中的已知人的miRNA数据；

③根据鉴定的miRNA进行表达量统计，miRNA表达量计算采用TPM(transcript permillion)计算度量指标，TPM公式＝(每条miRNA比对到的read数目)/(样本总比对read数目)×10⁶；

④将目的miRNA的表达量(TPM)进行相关计算，预测评分值＝-0.0061*miR-215+(-0.0011*miR-129-1-3p)+0.0120*miR-1283+(-0.0007*miR-126-3p)+(-0.0088*miR-199b-5p)。