[发明专利]HADHA mRNA的干扰序列及其验证方法

说明书

本发明涉及一种干扰序列，具体涉及HADHA mRNA的干扰序列及其验证方法，所述干扰序列的正义链如SEQ ID NO：1所示，所述干扰序列的反义链如SEQ ID NO：2所示；所述干扰序列的正向引物如SEQ ID NO：7所示，所述干扰序列的反向引物如SEQ ID NO：8所示。本发明还提供了上述干扰序列的验证方法，将序列构建在真核表达载体上，并以慢病毒包装的形式干扰靶基因的mRNA水平，从而降低靶蛋白的表达。本发明所提供的干扰序列可以有效的降低目的蛋白的表达，具有针对性强，保守性好，稳定性高的优点；同时该方法还可以得到稳定表达的细胞株，对于后续基础功能试验具有重要的意义。

技术领域

本发明涉及一种干扰序列，具体涉及HADHA mRNA的干扰序列及其验证方法。

背景技术

HADHA是线粒体三功能蛋白（Mitochondrial trifunctional protein，缩写TFP）的α亚基，是脂质代谢过程的重要因子，其分子量约为78-83 kDa。线粒体三功能蛋白是一种位于线粒体内膜上的蛋白质，其主要功能是催化线粒体长链脂肪酸β-氧化四个步骤循环中的2、3、4三步，它是一个异源八聚体，由四个α亚基（HADHA）和四个β亚基（HADHB）组成。其中，HADHA具有长链3-羟烷基辅酶A脱氢酶（long-chain 3-hydroxyacylcoenzyme Adehydrogenase，简称LCHAD）和烯脂酰辅酶A水合酶（enoyl-coenzyme A hydratase，简称ECH）活性，HADHB具有3-酮脂酰辅酶A硫解酶（3-ketoacyl-coenzyme A thiolase，简称KACT）活性。HADHA基因突变或者HADHA酶活性缺失（小于正常酶活性的50%）会导致出现LCHAD缺陷相关病症，这是一类线粒体脂肪酸β-氧化代谢紊乱病症，例如低血糖、嗜睡、心肌病、癫痫、色素性视网膜炎、昏迷、以及猝死等。

很多研究报道，HADHA与癌症的发病机制、预后、诊断等相关。2009年，Kim等人研究发现，肝癌细胞中HADHA的表达量明显低于正常细胞；2011年，Kageyama等人在研究肺癌病人化疗反应中发现，顺铂耐药性病人的HADHA具有较高水平的表达，预示HADHA在顺铂耐药方面可能具有一定的作用，或许可以作为肺癌化疗反应的预示标志；2012年，Manju研究小组发现，在乳腺癌尤其是转移性和复发性乳腺癌中，HADHA的表达量明显降低；2015年，Zhao等人研究表明，肾透明细胞癌中HADHA的表达量明显降低，并且HADHA的表达量与癌症的等级、转移性以及病人生存率紧密相关，HADHA可以成为肾透明细胞癌诊断或治疗的分子靶标；2019年，Kouhei Yamamoto研究小组发现，恶性淋巴瘤组织的HADHA有高表达趋势，可能会成为恶性淋巴瘤新的治疗靶标。

此外，HADHA功能涉及到miRNA、自噬和凋亡等过程。2015年，Pavan KumarKakumani等人报道，在细胞质中HADHA与Dicer酶共定位，参与Dider复合体的形成，并且高表达HADHA导致细胞内成熟miRNA的水平升高，说明HADHA在miRNA的产生以及RNAi干扰过程中有一定作用；2017年，Chiaki Maeyashiki研究小组发现，HADHA可以与LC3共定位并相互作用，参与细胞自噬及其他细胞死亡过程。

综上所述，HADHA蛋白参与脂质代谢、肿瘤诊断与治疗、miRNA、自噬及凋亡等重要生理过程，通过一定技术手段对其表达量进行调控对于了解各种生理病理过程会具有重要意义。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供HADHA mRNA的干扰序列。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

HADHA mRNA的干扰序列，其特征在于，所述干扰序列的正义链如SEQ ID NO：1所示，所述干扰序列的反义链如SEQ ID NO：2所示。

其中，所述干扰序列的正向引物如SEQ ID NO：7所示，所述干扰序列的反向引物如SEQ ID NO：8所示。