[发明专利]一种鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究方法

说明书

本发明公开了一种鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究方法，包括S1.纯化鸡EZH2原核蛋白，得到EZH2蛋白样品；S2.将纯化后的鸡EZH2原核表达蛋白与MSB1细胞共同培养，测定EZH2原核表达蛋白对MSB1细胞增殖的影响；S3.于不同时间提取细胞总RNA，检测MDV相关基因的表达水平并进行分析，测定EZH2原核表达蛋白对MDV相关基因的表达水平的影响；实验证明，鸡EZH2蛋白可影响MSB1细胞的增殖，且影响该细胞中MDV Meq和gB基因的表达，为进一步探究鸡EZH2在MDV感染致肿瘤中的作用机制研究奠定了基础。

技术领域

本发明涉及基因治疗技术领域，具体涉及一种鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究方法。

背景技术

EZH2(enhancer of zeste homolog 2)即Zeste增强子同源物2，是PRC2(多梳蛋白抑制复合体2)的主要组成部分，又可以称之为组蛋白赖氨酸甲基转移酶，表观遗传学领域的研究和实验已经证明靶向EZH2抑制剂可抑制PRC2的致癌活性，能够对癌细胞的发生、入侵与扩散形成一定的阻碍作用；由此可见EZH2在靶向治疗恶性疾病领域中的重要意义；

马立克氏病(MD)是由马立克氏病毒(Marek's disease virus,MDV)引起的高度传染性肿瘤性疾病，以引起T细胞瘤为特点，Meq(MDV Eco Q片段编码蛋白)是MDV基因组中重要的致癌基因，在潜伏肿瘤细胞中始终表达。Meq编码bZIP蛋白，其在N末端具有亮氨酸拉链结构域，在C末端具有富含脯氨酸的反式激活结构域；

而对于鸡EZH2基因与MDV基因组之间的靶向性关系，在现有技术中并没有相关记载。

发明内容

针对上述存在的问题，本发明旨在提供一种鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究方法，本方法通过对鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究，证明鸡EZH2蛋白可抑制MSB1的增殖，且影响该细胞中MDV Meq和gB基因的表达，为进一步探究鸡EZH2在MDV感染致肿瘤中的作用机制研究奠定了基础。

为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案如下：

一种鸡EZH2基因对肿瘤性疾病影响的研究方法，所述的研究方法包括步骤

S1.纯化鸡EZH2原核蛋白，得到含有纯化的His标签EZH2蛋白样品；

S2.将纯化后的鸡EZH2原核表达蛋白与MSB1细胞共同培养，测定EZH2原核表达蛋白对MSB1细胞增殖的影响；

S3.在步骤S2的基础上，于不同时间点提取细胞总RNA，检测MDV相关基因Meq、gB的表达水平并进行分析，测定EZH2原核表达蛋白对MDV相关基因Meq、gB的表达水平的影响。

优选的，步骤S1所述的鸡EZH2原核蛋白纯化的过程包括：

S101.将含有鸡EZH2原核表达载体的大肠杆菌Rosetta(PET-32a-EZH2)用1mmol诱导剂IPTG、29℃、诱导培养8h，收集细菌沉淀并称重，按每克细菌沉淀的湿重加入4ml非变性裂解液的比例加入非变性裂解液；

S102.加入溶菌酶至终浓度为1mg/ml，然后充分混匀，冰水浴30min；

S103.冰上超声裂解细菌，4℃、10000g下离心30min，将离心后的上清收于EP管中置于冰水浴或冰上；

S104.取1ml混合均匀的50％BeyoGold^TMHis-tag Purification Resin，4℃离心(1000g×10s)后弃去储存液，向纯化柱中的凝胶中加入0.5ml非变性裂解液，4℃离心弃平衡液，重复平衡2-3次之后加入细菌裂解液上清；

S105.将穿流液收集并重复上柱3-5次；