[发明专利]基于RAA扩增和CRISPR-Cas13a系统的SARS-CoV-2核酸检测方法有效
| 申请号： | 202110723406.2 | 申请日： | 2021-06-28 |
| 公开（公告）号： | CN113549618B | 公开（公告）日： | 2023-08-18 |
| 发明（设计）人： | 刘鸿博;宋宏彬;邱少富;王立贵;杜昕颖;向莹;杨明娟;杨超杰;刘洪波;王辉;王琪 | 申请（专利权）人： | 中国人民解放军疾病预防控制中心 |
| 主分类号： | C12N15/113 | 分类号： | C12N15/113;C12N15/10;C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11;C12N15/63 |
| 代理公司： | 北京市众天律师事务所 11478 | 代理人： | 李新军 |
| 地址： | 100071*** | 国省代码： | 北京;11 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 基于 raa 扩增 crispr cas13a 系统 sars cov 核酸 检测 方法 | ||
1. 一种用于CRISPR-Cas13a技术检测SARS-CoV-2核酸的crRNA分子，所述crRNA分子的序列如SEQ ID NO.11所示。
2. 一种应用权利要求1所述crRNA分子基于非诊断目的的CRISPR-Cas13a技术检测SARS-CoV-2 核酸的方法，所述方法包括以下步骤：
（1）制备样本核酸模板；
（2）使步骤（1）获取的核酸模板，Cas13a蛋白、荧光基团和荧光淬灭基团双标记的RNA探针，以及所述crRNA分子在CRISPR-Cas13a反应体系里反应，所述crRNA分子的序列如SEQ IDNO.11所示；
（3）对步骤（2）的反应体系进行荧光强度的检测。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤（1）所述的样本核酸模板由重组酶聚合酶核酸扩增方法制备。
4. 根据权利要求3所述的方法，其特征在于， 所述重组酶聚合酶核酸扩增的上游引物的序列如SEQ ID NO. 27所示，所述重组酶聚合酶核酸扩增的下游引物的序列如SEQ IDNO.29所示。
5. 根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，步骤（2）所述RNA探针的序列如SEQID NO.13所示。
6. 一种CRISPR-Cas13a技术检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的crRNA分子 ，Cas13a蛋白、荧光基团和荧光淬灭基团双标记的RNA探针，以及用于重组酶聚合酶核酸扩增的上游引物，用于重组酶聚合酶核酸扩增的下游引物，所述crRNA分子的序列如SEQ ID NO.11所示，所述重组酶聚合酶核酸扩增的上游引物的序列如SEQ ID NO. 27所示，所述重组酶聚合酶核酸扩增的下游引物的序列如SEQ ID NO.29所示。
7. 根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA探针的序列如SEQ ID NO.13所示。
8. 一种用于制备权利要求1所述crRNA的上游DNA单链和下游DNA单链，其特征在于，所述上游DNA单链的序列如SEQ ID NO. 33所示，所述下游DNA单链的序列如SEQ ID NO.12所示。
9. 一种用于制备权利要求1所述crRNA的方法，其特征在于，先使序列如SEQ ID NO.33所示的上游DNA单链和序列如SEQ ID NO.12所示的下游DNA单链进行杂交制备DNA体外转录模板，再根据所述DNA体外转录模板转录制备所述crRNA。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于中国人民解放军疾病预防控制中心，未经中国人民解放军疾病预防控制中心许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202110723406.2/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
